Звезда «Битвы экстрасенсов» Николь Кузнецова показала фото до пластики

Николь Кузнецова

Фото: Instagram

Недавно, 25 августа, Николь Кузнецовой исполнилось 33 года. По такому случаю экстрасенс опубликовала в своем Инстаграме раритетные фотографии, собрав их в коллаж. Интернет-пользователи заметили, как изменилась звезда «Битвы экстрасенсов». На подростковых снимках у Кузнецовой еще нет шрама на шее, на других – у нее «старый» нос, еще до ринопластики.

Николь никогда не скрывала, что сделала несколько операций на лице, пытаясь исправить, как она пишет, курносость. Изначально хирургическое вмешательство было показанием лечащих врачей, ведь Николь страдает от врожденного заболевания. 

«Я все решила! Раз мне все равно надо делать операцию на мой курносый нос, решила сразу сделать и эстетику. Не отговаривайте! Не пишите гадости, я все решила и это действительно необходимо. Предыдущее вмешательство принесло серьезные проблемы и это надо исправить», — писала Кузнецова в прошлом году перед очередной операцией на нос.

Николь Кузнецова до ринопластики

Фото: Instagram

Долгие годы Николь Кузнецова дышала через трубку в горле, говорила хриплым шепотом. Она перенесла 290 операций, а благодаря последней, сделанной в Германии, Николь наконец-то освободилась от трахеостомической трубки. Кузнецовой сделали уникальную операцию, в результате которой медики реконструировали пораженную гортань. Несмотря на успешную операцию, Николь по-прежнему сможет говорить только очень тихо, и ей вряд ли удастся полностью восстановиться. Однако сейчас Кузнецовой доступно гораздо больше простых земных радостей, которые были невозможны раньше.

не пропуститеПеренесшая 290 операций Николь Кузнецова избавилась от трубки в горле

«Отныне на моей шее есть только небольшой шрам, напоминающий о трахеостоме. Теперь мои мечты осуществятся – можно окунаться в воду с головой, плавать, нырять и свободно стоять под душем! Я могу дышать, как все обычные люди, говорить, ничего не закрывая! Больше никаких шарфов и пластырей», – написала Кузнецова.

Николь Кузнецова

Фото: Instagram

Болезнь у Николь – врожденная. Из-за тяжелого заболевания от младенца отказались родные родители. Когда девочке еще не было года, ее забрали из дома малютки и удочерили. Она получила новое имя, отчество и даже дату рождения, испытывая большую любовь и благодарность к приемным родителям, Николь никогда и не думала искать своих биологических маму и папу. «Я не знаю, как я выглядела в детстве. Нет ни одной моей фотографии до года. Мои родители никогда не скрывали, что не являются моими биологическими, наверное, многим это покажется странным, но я никогда не анализировала их решение. Мама с папой так и не родили своего общего ребенка, а я никогда даже в мыслях не думала искать своих биологических родителей. Я считаю, что если внутри себя начну задавать эти вопросы, то предам память отца и буду плохой дочерью. Мама у меня одна. Та, что ночами слушала, дышу я или нет и только так и никак иначе. Удивительным образом у меня такие же зеленые глаза, как у мамочки, а мой старший сын на нее похож!» – написала однажды Николь Кузнецова.

биография, личная жизнь, фото до и после пластика, болезнь

Поклонники «Битвы экстрасенсов» надолго запомнили финалистку 16 сезона проекта Николь Кузнецову. Ее личная жизнь и творчество наполнены интересными событиями и загадками. Это статья приоткроет завесу тайны и расскажет о биографии Николь Кузнецовой.

Детские и юные годы

Девочка не знает о своих биологических родителях. Сразу после ее рождения им был озвучен диагноз о неизлечимой болезни ребенка, после которого они отказались от него. В семью ее взяла Светлана Тернова.

Девочка жила с мамой и папой, который дружил с криминальным авторитетом по кличке Япончик. Несмотря на строгое воспитание, Николь говорит о родителях только в хорошем ключе. Ведунья окончила школу и обучалась в московском университете на гуманитарном направлении.

Ясновидящая с детства любила крупные бусы и серьги

Дар ясновидения

Николь Кузнецова рассказывала о том, что магический дар она получила после второй клинической смерти. Девочка в 6 лет предсказывала будущее родных, говоря о событиях, болезнях и других фактах. Родители верили словам девочки, потому что все, что говорила Николь, воплощалось в реальность.

На заметку:
В детстве девочка перенесла 2 клинические смерти. Первая была в возрасте 1 года, а вторая – в 6 лет.

В 15 летнем возрасте Николь взяла псевдоним Агата Матвеева и стала развивать свои экстрасенсорные способности. К ней обращались люди, чтобы она предсказала им судьбу и помогла принять решение в сложной ситуации.

Появление на «Битве экстрасенсов» и других телепроектах

Заявку на участие в проекте отправил ее директор. После рассмотрения Николь пригласили принять участие в шоу. Девушка, недолго думая, приняла приглашение. Рыжеволосая красавица понравилась многим телезрителям. Часть из них наблюдала за ней и верила в ее способности, а другая – отрицала и называла все действия игрой на публику.

В шоу Кузнецова заняла третье место, уступив Виктории Райдос и Мэрилин Керро. В 2017 году Николь снялась в проекте «Экстрасенсы ведут расследование. Битва сильнейших». В 2019 году девушка отправилась на отдаленный остров в рамках шоу «Последний герой».

С самого первого конкурса Кузнецова произвела впечатление на зрителей и ведущего

Перед собой она поставила цель – проверить свои физические и душевные силы. На проекте она не вступала ни с кем в конфликты и особенно тесно общалась с Аидой и Татьяной Лариной.

Личная жизнь

Многие поклонники не оставляют без внимания личную жизнь рыжеволосой красавицы. Первым избранником Николь стал друг отца. Белая ведьма родила от него сына Егора, который также имеет экстрасенсорные способности. Егор родился инвалидом и страдает сахарным диабетом.

Девушка говорила о том, что старший сын был рожден в браке, однако, по расчетам некоторых скептиков, девушка забеременела до 18 лет. Сейчас ведунья находится в отношениях с Александром Садоковым – телеведущим и комментатором спортивных мероприятий.

Николь говорит, что ее нынешний муж является для нее настоящей опорой

От второго мужа Николь Кузнецова родила младшего сына Степана. Семья прекрасно проводит время вместе, и Александр принимает сына Николь от первого брака.

Николь Кузнецова сейчас

В 2015 году Николь открыла школу «Центр правильной магии» с целью обучения всех желающих магическим способностям. Позднее открылся интернет-магазин с необходимой магической атрибутикой. Ведунья проводит курсы, где рассказывает, как научиться слышать себя.

На заметку:
Николь не проводит ритуалов по приворотам, уничтожению соперников и прочее. Девушка помогает только тем, кто действительно стоит перед сложным выбором.

Бывшая жена Япончика является активным автором издания «Я вижу Вашу душу! Книга-оберег». В нем ясновидящая делится советами по привлечению удачи и защиты от негативных воздействий. В 2017 году белая ведьма сделала пластическую операцию по изменению формы носа.

По словам девушки, вмешательство хирургов было крайне необходимо для здоровья. Фото ведуньи до и после пластики представлено ниже. В 2018 году Кузнецова открыла салон красоты под названием «Студия перевоплощения».

На фотографиях видно, что нос девушки стал более аккуратным

Интересные факты

• Экстрасенсу предлагали большие деньги за участие в разоблачении проекта «Битва экстрасенсов». Она отказалась от приглашения, объяснив это тем, что на телевидение невозможно снимать что-либо без актеров. Однако ее способности этот факт не отрицает.
• Николь снималась в клипе певицы Наргиз «Я буду всегда с тобой».

Частые вопросы о болезни Николь Кузнецовой

В 2020 году поклонники продолжают задавать вопросы о заболевании Николь. Несмотря на то что девушка давала комментарии уже несколько раз, интерес к этой теме не угасает. Диагноз был поставлен ясновидящей еще при рождении. В 2012 году в ее горло вставили трубку, позволяющую нормально дышать.

Девушка появлялась на публике и, в частности, на шоу «Битва экстрасенсов» в платках и шарфиках, чтобы не привлекать внимание к прибору. Кроме того, она была вынуждена переходить на шепот, чтобы справляться с симптомами болезни.

За всю жизнь Николь перенесла около 300 операций

После операции в Германии в 2018 году Николь смогла избавиться от трубки. Теперь ей предстоит каждые 3 месяца посещать хирурга. Девушка регулярно выкладывает отчеты об операциях в своем Инстаграме.

Николь Кузнецова, бесспорно, интересная личность. В ее дар верят далеко не все люди, называя ведунью мошенницей и шарлатанкой. Тем не менее, нельзя не назвать карьеру Николь успешной, так как она сотрудничает с популярными брендами, ведет собственный бизнес и имеет полумиллионную аудиторию в социальных сетях.

Звезда «Битвы экстрасенсов» Николь Кузнецова показала фото до пластики

Интернет-пользователи заметили, как изменилась звезда «Битвы экстрасенсов». На подростковых снимках у Кузнецовой еще нет шрама на шее, на других – у нее «старый» нос, еще до ринопластики.

Николь никогда не скрывала, что сделала несколько операций на лице, пытаясь исправить, как она пишет, курносость. Изначально хирургическое вмешательство было показанием лечащих врачей, ведь Николь с страдает от врожденного заболевания. 

Звезда «Битвы экстрасенсов» Николь Кузнецова в Instagram

+33
Skatīties vairāk

«Я все решила! Раз мне все равно надо делать операцию на мой курносый нос, решила сразу сделать и эстетику. Не отговаривайте! Не пишите гадости, я все решила и это действительно необходимо. Предыдущее вмешательство принесло серьезные проблемы и это надо исправить», — писала Кузнецова в прошлом году перед очередной операцией на нос.

Долгие годы Николь Кузнецова дышала через трубку в горле, говорила хриплым шепотом. Она перенесла 290 операций, а благодаря последней, сделанной в Германии, Николь наконец-то освободилась от трахеостомической трубки. Кузнецовой сделали уникальную операцию, в результате которой медики реконструировали пораженную гортань. Несмотря на успешную операцию, Николь по-прежнему сможет говорить только очень тихо, и ей вряд ли удастся полностью восстановиться. Однако сейчас Кузнецовой доступно гораздо больше простых земных радостей, которые были невозможны раньше.

«Отныне на моей шее есть только небольшой шрам, напоминающий о трахеостоме. Теперь мои мечты осуществятся – можно окунаться в воду с головой, плавать, нырять и свободно стоять под душем! Я могу дышать, как все обычные люди, говорить, ничего не закрывая! Больше никаких шарфов и пластырей», – написала Кузнецова.

Связанные новости

Николь Кузнецова готовится к очередной операции: ей предстоит лечь под нож в 234 раз

Звезда «Битвы экстрасенсов» Николь Кузнецова лишилась возможности говорить

Звезда «Битвы экстрасенсов» находится в тяжелом состоянии после операции

Starhit

Рекомендуем

Тайна болезни Димы Билана: чем на самом деле болен 36-летний певец?

Вскрылась тайна рождения детей Аллы Пугачевой

Бритни Спирс эмоционально прокомментировала «лицемерные» документальные фильмы о своей жизни

Николь кузнецова пластика носа — Всё о ринопластике

Звезда «Битвы экстрасенсов» Николь Кузнецова показала фото до пластики

В свой день рождения один из самых ярких участников 16-ого сезона мистического шоу поделилась личными фотографиями, некоторые из которых были сделаны задолго до того, как Николь Кузнецова сделала ринопластику.

Недавно, 25 августа, Николь Кузнецовой исполнилось 33 года. По такому случаю экстрасенс опубликовала в своем Инстаграме раритетные фотографии, собрав их в коллаж. Интернет-пользователи заметили, как изменилась звезда «Битвы экстрасенсов». На подростковых снимках у Кузнецовой еще нет шрама на шее, на других – у нее «старый» нос, еще до ринопластики.

Николь никогда не скрывала, что сделала несколько операций на лице, пытаясь исправить, как она пишет, курносость. Изначально хирургическое вмешательство было показанием лечащих врачей, ведь Николь страдает от врожденного заболевания.

Долгие годы Николь Кузнецова дышала через трубку в горле, говорила хриплым шепотом. Она перенесла 290 операций, а благодаря последней, сделанной в Германии, Николь наконец-то освободилась от трахеостомической трубки. Кузнецовой сделали уникальную операцию, в результате которой медики реконструировали пораженную гортань. Несмотря на успешную операцию, Николь по-прежнему сможет говорить только очень тихо, и ей вряд ли удастся полностью восстановиться. Однако сейчас Кузнецовой доступно гораздо больше простых земных радостей, которые были невозможны раньше.

Болезнь у Николь – врожденная. Из-за тяжелого заболевания от младенца отказались родные родители. Когда девочке еще не было года, ее забрали из дома малютки и удочерили. Она получила новое имя, отчество и даже дату рождения, испытывая большую любовь и благодарность к приемным родителям, Николь никогда и не думала искать своих биологических маму и папу. «Я не знаю, как я выглядела в детстве. Нет ни одной моей фотографии до года. Мои родители никогда не скрывали, что не являются моими биологическими, наверное, многим это покажется странным, но я никогда не анализировала их решение. Мама с папой так и не родили своего общего ребенка, а я никогда даже в мыслях не думала искать своих биологических родителей. Я считаю, что если внутри себя начну задавать эти вопросы, то предам память отца и буду плохой дочерью. Мама у меня одна. Та, что ночами слушала, дышу я или нет и только так и никак иначе. Удивительным образом у меня такие же зеленые глаза, как у мамочки, а мой старший сын на нее похож!» – написала однажды Николь Кузнецова.

Николь Кузнецова пострадала от неудачной ринопластики

Финалистка «Битвы экстрасенсов» Николь Кузнецова поделилась подробностями последней операции. На последней ринопластике врач ввел Кузнецову в наркоз, но не произвел хирургического вмешательства, из-за ошибки врача российской клиники.

Николь Кузнецова стала популярной после участия в шоу «Битва экстрасенсов», и теперь ее поклонники внимательно следят за новостями о состоянии здоровья «ведьмы». В результате тяжелого заболевания Кузнецова вынуждена регулярно ложиться в клинику из-за операций на горле. Помимо этого, она должна ходить с трахеотомической трубкой, ведь только так у Кузнецовой есть возможность дышать. Как оказалось, последняя операция ухудшила состояние экстрасенса.

Николь рассказала, что врач просто не мог сделать операцию. Он ввел ее в наркоз, в котором Кузнецова находилась час, а в результате обследования состояние лишь ухудшилось. Не говоря уже о сумме, которую потратили на обследования и несостоявшуюся операцию. Один из лучших специалистов, профилирующий по заболеванию Николь, не смог провести операцию из-за ошибок российских врачей. Однако, Николь благодарна за честность медика, который отказался делать операцию без возможности ее положительного исхода, хоть и разочарована результатами. На данный момент остается шанс, что профессор в Штутгарте успешно проведет хирургическое вмешательство и сделает реконструкцию.

Как рассказывает экстрасенс, из-за малого количества кислорода, она постоянно замерзает. В этой тяжелой для Николь ситуации поддержкой служит ее любимый муж. Однако Николь все равно расстраивается, что у нее нет возможности и сил ходить на прогулки и экскурсии по красивому городу.

«Честно скажу, что мне очень грустно и обидно. Я злюсь сама на себя, вроде так все просто — пройтись по улице, зайти покушать в кафешку. И как много сил на это нужно! Обидно лежать под одеялом, словно сбитый опоссум, на обочине, когда все гуляют и фотографируют достопримечательности. Сама себя убеждаю, что приеду, сюда еще и тогда мне будет лучше и побываю во всех интересных местах», — пишет экстрасенс.

Ко всему прочему, из-за неудачной ринопластики Кузнецова боится любой травмы лица. Вроде бы известный и опытный специалист проводил операцию, а результат привел к неудачным последствиям.

«Внешне это незаметно и для меня было шоком узнать, что мой носик держится фактически на коже, натянутой от переносицы до кончика. Любая травма, и он может просто провалиться. Я не знаю, как это возможно? Врач, который делал мне рино, очень раскрученный, были проблемы с «курносостью», которую он вроде как решил. Решил за счет хрящей в носу!»

Ошибка в тексте? Выделите ее мышкой! И нажмите: Ctrl + Enter

Редакция сайта не несет ответственности за достоверность авторских статей. Верить или нет — решать вам!

Николь Кузнецова рассказала о неудачной пластической операции

29-летняя Николь Кузнецова, участница «Битвы Экстрасенсов», не скрывает, что сделала себе пластическую операцию. Вернее, звезда сделала себе ринопластику, а до этого девушка выглядела совершенно иначе.

И только недавно стало известно, какие ужасные последствия имела данная процедура. Николь сама об этом рассказала в своем «Инстаграм».

В сообщении Николь написала, что недавно во время комплексного обследования выяснились ужасные вещи: после той операции у дольно именитого врача у нее в носу не обнаружился хрящевой каркас, вернее, обнаружилось его отсутствие. Хоть внешне это и не заметно, однако для нее узнать такое было настоящим шоком. Как реагировать на информацию, что твой нос держится буквально только лишь на коже, которую натянули от переносицы до кончика? Такой нос может провалиться от любой травмы. По словам Николь, она даже не представляет, как такое вообще возможно.

Кузнецова говорит, что тот доктор, который сделал ей ринопластику, очень раскрученный среди знаменитостей. А у нее были проблемы с курносостью, которую он якобы полностью решил. А, оказалось, решил он ее за счет ее носовых хрящей. Николь говорит, что теперь ей требуется время, чтобы осознать весь масштаб этой всплывшей проблемы. Также экстрасенс добавила, что, наверное, именно из-за манипуляций недобросовестного врача ее синяк на переносице не сходит с самого августа. А еще Николь спрашивает совета у фолловеров: к кому теперь ей бежать и кто сталкивался с подобной проблемой?

Свое сообщение звезда снабдила хэштегами #шок #ринопластика #николькузнецова #рукожоп.

На счастье этого раскрученного пластического хирурга, Николь Кузнецова не стала называть его имя. Хотя вполне и могла это сделать. А еще могла отправиться на какое-нибудь отечественное ток-шоу и за деньги рассказать об этом эскулапе всей стране.

Источники: http://www.starhit.ru/novosti/zvezda-bitvyi-ekstrasensov-nikol-kuznetsova-pokazala-foto-do-plastiki-150723/, http://rsute.ru/484983-nikol-kuznecova-postradala-ot-neudachnoj-rinoplastiki.html, http://govoru.com/news/incidents/2018/02/13/nikol-kuznetsova-rasskazala-o-neudachnoi-plasticheskoi-operatsii. html

Николь Кузнецова избавилась от трубки для дыхания

Николь Кузнецова (29) прославилась после того, как пришла на проект «Битва экстрасенсов». Там ясновидящая дошла до финала, но заветную статуэтку так и не получила, заняв только третье место.

Напомним, Николь с детства страдает неизлечимой болезнью: ей трудно дышать, делает она это через специальную трубку в горле, поэтому и разговаривает шепотом. Но недавно Кузнецова отправилась в Германию на очередную операцию (их у нее было около трехсот) и, как оказалось, врачам удалось избавить экстрасенса от трубки.

Правда, теперь Николь ждет долгий восстановительный процесс. «Про голос разговор вообще пока не идет: все операции делаются ради того, чтобы спасти мне жизнь. Сейчас идет восстановительный период — болезненный и небыстрый. Врачи осторожны в своих прогнозах. В Россию я смогу вернуться только тогда, когда опасность для дыхания минует — и то ненадолго. Нужно набраться терпения: ведь до этого я перенесла почти три сотни операций, и в больном горле давно не оставалось живого места. Удивительно, что кто-то вообще взялся мне помочь: во всем мире единицы специалистов, которые готовы так рискнуть. Впереди немало боли, но еще больше надежды!», — призналась Кузнецова изданию StarHit.

В своем Instagram, кстати, экстрасенс постоянно делится с подписчиками новостями о своем здоровье. Вот и сегодня Николь рассказала, что врачи все же отпустили ее домой. «Через 3 недели я вернусь обратно, на свою юбилейную, 290 операцию, но сейчас меня отпустили домой и я безумно счастлива. Отвечу на саааамый часто задаваемый вопрос: «НЕТ, ДРУЗЬЯ,ГРОМКОГО ГОЛОСА НЕ БУДЕТ». Москва, встречай! Всего 3 часа и в объятиях любимого #мечтысбываются #николькузнецова #операция #битваэкстрасенсов», — написала Кузнецова (Орфография и пунктуация автора сохранены. — Прим.ред.).

Мы желаем Николь скорейшего восстановления!

Серьезно! Звезда «Битвы экстрасенсов» сделала… 298-ю операцию

Николь Кузнецова — звезда и финалистка 16 сезона «Битвы экстрасенсов» (на проекте она заняла третье место). По ее словам, дар ясновидения открылся у нее после второй клинической смерти в шестилетнем возрасте: мол, она «видела» судьбу родных, предвидела болезни и события из жизни знакомых.

А еще Николь рассказывала, что с детства страдает неизлечимой болезнью (какой именно — неизвестно) и ходит со специальной трубке в горле, которая позволяет ей дышать и говорить хотя бы шепотом. Из-за болезни она постоянно ложится под нож, и на днях поделилась в Instagram, что перенесла уже 298-ю по счету операцию!

«Я болею всю жизнь, и вот уже на протяжении 33 лет мне делают операции. К сожалению, вылечить меня невозможно. Никак. Никогда. Никому. Операции мне делать необходимо всегда, регулярно и до конца жизни. Без них я не могу дышать. Голоса нет, не было и не будет. Никогда. Я не делаю операции, чтобы он был громче. Это невозможно», — рассказала Николь. 

View this post on Instagram

Сбилась я со счета операций ещё 1,5 года назад. ⠀ Сейчас посчитала по выпискам — сегодня была 298!!!! ⠀ Да да, человек существо выносливое, может пережить 298 операций и даже жить при этом;) ⠀ Так что 2̶9̶0̶ это был не верный отсчёт, спасибо моим подписчикам за внимательность. ⠀ ⠀ Сейчас проявлю чудеса экстрасенсорики и отвечу на все ваши вопросы, которые вы хотели бы задать: ⠀ Я болею всю жизнь, и вот уже на протяжении 33 лет мне делают операции. К сожалению, вылечить меня невозможно. Никак. Никогда. Никому. ⠀ Операции мне делать необходимо всегда, регулярно и до конца жизни. Без них я не могу дышать…⠀ ⠀ Голоса нет, не было и не будет. Никогда. Я не делаю операции, чтобы он был громче. Это невозможно.⠀ ⠀ На все операции езжу с мужем. Если бы не он, растеклась бы я уже унылым ? ещё лет 7 назад. ⠀ ⠀ Для любителей «теории заговора», которые тычат в мои старые фото с язвительными комментариями «тут же нет трубки» или «а где трубка». Ее мне экстренно установили, когда я была на 6-м месяце беременности Стёпкой, а полтора года назад в Германии профессор смог ее снять. Остался только небольшой шрам, который на проф. фото убирают в фш, а на обычных снимках его видно. ⠀ ⠀ Хочу сказать большое спасибо всем моим подписчикам, кто поддерживает, пишет добрые слова и молится за меня!!! ⠀ Мне очень важно и приятно ощущать, что вы рядом! ⠀ ⠀ Завтра я возвращаюсь домой, к детишкам и в привычную жизнь. Поскорее бы вернуться в строй…⠀ ?.?. В сторис мой громкий голос;) Кто не слышал — загляните;) ⠀ #298 #николькузнецова #операция #госпиталь #больница

A post shared by ☆Экстрасенс Николь Кузнецова☆ (@nikol. official) on Nov 14, 2019 at 5:07am PST

звезда Битвы экстрасенсов Николь Кузнецова показала фото до пластики

Не так давно у одной из самых ярких участников популярного телешоу «Битва экстрасенсов» Николь Кузнецовой был день рождения. Рыжеволосой красавице исполнилось 33 года и в честь этого радостного события звезда решила поделиться с фанатами кадрами своей молодости ещё до ринопластики.

Николь Кузнецова: звезда показала фотографию из юности

Буквально 25 августа рыжеволосой красавице Николь Кузнецовой исполнилось 33 года. Она решила по такому поводу порадовать свою многочисленную армию поклонников и поделилась архивными фотокадрами. Подписчики звезды тут же отметили, что она заметно изменилась с тех пор. Они заметили на подростковых кадрах, что шрама у Николь нет, а нос выглядит совершенно по-другому. Кузнецова несколько раз рассказывала свои фанатам о том, что делала себе пластику несколько раз, пытаясь избавиться от курносости.

Именно врачи посоветовали хирургическое вмешательство, потому что у Николь есть врожденное заболевание. Ещё в прошлом году звезда писала о том, что решилась исправить курносый нос и заодно сделать эстетику. дело в том, что предыдущее хирургическое вмешательство оказалось не удачным и теперь необходимо исправить последствия. Много лет рыжеволосая красавица дышала не так, как все люди, а через трубку в своём горле и поэтому говорила довольно хриплым шепотом. Всего Никол перенесла порядка 290 операций. А некоторое время назад она снова пережила медицинское вмешательство в Германии, и врачи смогли освободить её от трахеостомической трубки. Специалисты смогли реконструировать повреждённую гортань.

Николь Кузнецова: звезда может нормально дышать

Николь не может говорить громко, несмотря на удачную операцию. Вряд ли она когда-нибудь сможет полностью восстановиться. Но теперь звезда испытывает настоящее счастье от того, что трубка ей больше не мешает. По словам Кузнецовой, на её шее есть лишь небольшой шрам, как напоминание о болезни. Однако знаменитость счастлива, что медики смогли ей помочь. Николь дышит теперь как все обычные люди и не станет больше использовать шарфов, которые прикрывают трубку. Добавим также, что заболевание у Николь врожденное. От неё даже отказались родители после рождения.

Позже малышку удочерили. Она сменила имя, фамилию и даже дату рождения. Кузнецова благодарна приёмным родителям за то, что они её удочерили и воспитали. Она никогда не пыталась искать своих биологических родителей и любит приёмных. Николь считает, что её старший сын похож на маму, которая воспитала её. У пары не было общих детей, но они дали Николь всё самое необходимое в жизни. Кузнецова считает своей родной мамой только ту, которая не спала по ночам и прислушивалась, дышит ли девочка или нет и поддерживала её во всём.

Николь Кузнецова после пластики сравнили с Натальей Орейро — Звездные войны

Психологический гипс сняли и с радостью продемонстрировали новый нос. Ясновидящая довольна результатом и ждет окончания реабилитационного периода. Поклонники отметили, что Николь Кузнецова стала еще больше напоминать им аргентинскую актрису Наталью Орейро.

Финалистке 16-го сезона популярного телешоу «Битва экстрасенсов» Николь Кузнецова постоянно приходится обращаться к хирургам с просьбой сохранить здоровье экстрасенса, дышащего через трахеотомическую трубку в горле. Николь Кузнецова о тяжелом заболевании: «Слава богу, что это не рак»

Недавно Кузнецова была вынуждена сделать пластику носа по медицинским показаниям. Экстрасенс решил немного изменить его форму. Раньше ей сняли гипс и она смогла продемонстрировать влияние пластического хирурга. Поклонники пришли в восторг от внешнего вида Николь, а некоторые даже нашли сходство со всемирно известной аргентинской певицей и актрисой Натальей Орейро.

«Вы, кстати, похожи на мою любимицу Наталью Орейро! И нос теперь тоже »,« Ага, я… ​​Стань как ты на Наталье Орейро! »,« Всегда замечала, что ты похожа на мою любимую Наталью Орейро, теперь ты стала больше похожа на нее »,« Как будто у тебя все было хорошо, и ушла. Носик сделан на отлично! Главное не шаблонно! А теперь все по-прежнему! » — написали фанаты.

Николь с удовольствием делится впечатлениями от пластической хирургии. Он не стремится ввести в заблуждение своих последователей, рассказывая только о преимуществах трансформации. Также экстрасенс делится проблемами, возникшими в процессе реабилитации, и спрашивает совета у тех, кто, возможно, сталкивался с подобными ситуациями.

«Немного послушай, ты кассета… он определенно хорошо выглядит.Я хотел спросить. Друзья, кто делал рено или сломал нос? Во сне у вас отек и чем мажут? Пока можете смело называть меня аватаркой. На самом деле похоже. Жду ваших советов! » — спросил Кузнецов.

Многие фанаты поспешили поделиться своим опытом и сказали, что они помогли преодолеть последствия хирургического вмешательства.

Сейчас Николь вернулась к работе, несмотря на то, что буквально неделю назад лежала на операционном столе. Судя по всему, семья Кузнецовых ушла в трепет перед врачом, который сумел поправить нос экстрасенсу.Николь призналась, что любимый муж высмеивает ее внешность.

«Синяки все еще есть, нос опух (любимый говорит, что не понимает, что я из себя представляю. Два варианта: летать или буйвол). В целом нос хоть и опухший и твердый, мне он очень нравится. Аккуратный малыш, который скоро станет совсем похож на красивый человеческий нос! Ничего не болит, дыхание свободное, крови нет. Такова история первого дня жизни без гипса моего нового носа », — сказала Кузнецова.

Открытый чемпионат Франции по теннису: история двух швейцарцев — победа Федерера и водопад Хингис — Спорт — International Herald Tribune

Кузнецова, победившая Динару Сафину, 7-6 (7-5), 6-9, является признанной соперник, который часто тренируется на грунте в Барселоне.В этом году она восстановила свою форму после борьбы после победы на Открытом чемпионате США 2004 года.

Но высокая, временами темпераментная Вайдисова никогда не доходила до четвертьфинала в мейджоре до приезда в Париж. Тем не менее, в последних двух раундах она безжалостно приближалась к авторитетным деятелям. В четвертом раунде она с ревом обошла первую посевную Амели Моресмо в трех сетах, а во вторник она сделала то же самое с другой бывшей первой ракеткой Винус Уильямс, победив со счетом 6-7 (7-5. ), 6-1, 6-3, с ее большой подачей и ударами земли, наносящими постоянный урон.

Это был, без сомнения, прорыв, хотя вряд ли шок, учитывая, насколько заблаговременно Вайдисова и ее кураторы сообщили о ее главном потенциале. Тренируемая отчимом Алексом Кодатом, она с подросткового возраста проводила время между Европой и Теннисной академией Боллеттьери во Флориде, принадлежащей ее управляющей компании IMG.

«Я вижу ее как тройку, четверку, пятерку», — сказал Боллеттьери по телефону.

Когда она вышла в четвертый раунд на прошлогоднем U.S. Open, она устроила истерику после поражения от Наде Петровой, бросила ракетку и пластиковую бутылку на площадку после проигрыша в первом сете, а затем злобно бросила мяч в трибуны после проигрыша во втором. Были намеки на еще один провал в ее победе в третьем раунде над французской квалификационной Араван Резаи, когда она прослезилась и оплакивала свою судьбу после того, как оторвалась от лидерства во втором сете, но с тех пор она стала намного более замкнутой.

«Я думаю, что поражение на Открытом чемпионате США научило ее хладнокровию, лучшему контролю над собой, и сегодня это принесло хорошие дивиденды», — сказал Боллеттьери.«Я думаю, что в прошлом году она действительно чувствовала себя под давлением. Она так хорошо выступила, выиграла титулы».

Сюрприз в том, что ее большой прыжок вперед произошел на грунте, который, казалось бы, не был идеальным для ее игры с плоскими ударами, а иногда и для жесткой работы ног.

В мужской жеребьевке не было сейсмических сдвигов. Федерер, посевной номер 1, проиграл только один сет в своих первых пяти матчах, с отработанной грацией справляясь с давлением и разнообразием противников и стилей. Но если он станет первым со времен Рода Лейвера в 1969 году, обладателем всех четырех титулов Большого шлема в одиночном разряде, похоже, ему придется сделать это против лучших в своем бизнесе.

Включение углерода, полученного из корней, в почвенные микроартроподы варьируется в зависимости от системы возделывания

Влияние системы выращивания на использование корня C

Коллембола быстро включила помеченный C в каждую из систем возделывания (рапс, трава и ива), Это указывает на то, что почвенные пищевые сети в этих системах земледелия подпитываются недавно установленным C. Это согласуется с предыдущими исследованиями, показывающими, что почвенные беспозвоночные внедрили недавно зафиксированный C в пахотные системы, пастбища, умеренные и северные леса, скорее всего, через ризотложения и ассоциированные микроорганизмы (Pollierer et al.2007; Högberg et al. 2010; Seeber et al. 2012; Eissfeller et al. 2013; Гончаров и др. 2016; Scheunemann et al. 2016). Наше исследование впервые показало, что динамика включения недавно зафиксированного C и его распределение между различными функциональными группами и видами Collembola заметно различаются в разных системах земледелия.

Подтверждая нашу первую гипотезу, включение ¹³ C в коллемболу достигло пика в дни 0–3 у травы и ивы, но на 7 или 14 день у рапса (рис.1, 2 и 3), что свидетельствует о более медленном поступлении С из корня в коллемболу у рапса, чем у травы и ивы. В других экспериментах по маркировке включение ¹³ C в Collembola также увеличивалось со временем на пахотных землях (Pausch et al., 2016; Scheunemann et al., 2016), при этом оставаясь относительно постоянным или без четкой тенденции на пастбищах (Ostle et al. 2007) и лес (Högberg et al. 2010; Fujii et al. 2016). Это может отражать более низкое распределение углерода в корнях рапса по сравнению с травой и ивой (Кузяков и Доманский, 2000; Пауш и Кузяков, 2018), предположительно потому, что виды сельскохозяйственных культур отбираются таким образом, чтобы максимально увеличить рост собранных компартментов растений (Пауш и Кузяков, 2018).Напротив, многолетние травы переносят больше углерода под землю (30–50%), чем культуры (20–30%), поскольку они полагаются на подземные запасы углерода для отрастания весной и после выпаса скота или скашивания (Пауш и Кузяков, 2018). Внесение удобрений, вероятно, еще больше снизило выделение углерода под землей в рапсе. Как правило, удобрение азотом снижает выделение углерода корнями и соотношение биомассы корней и побегов (Hermans et al. 2006), что прямо или косвенно приводит к снижению поступления углерода в почвенные микроорганизмы и животных (Ai et al.2015; Denef et al. 2009; Högberg et al. 2010). Подтверждая это предположение, обогащение растворенного органического углерода в почве ¹³ C постепенно увеличивалось и достигло пика на 14-й день у рапса, тогда как оно достигло максимума на 3-й день у травы и ивы (Таблица S3), что отражает более низкую экссудацию и / или меньшую микробную ассимиляцию. эффективность корневых экссудатов у рапса, чем у травы и ивы. Таким образом, эффективность передачи углерода корневого происхождения микроорганизмам и микробоядным членистоногим предположительно была ниже у рапса, чем у травы и ивы.

Связь между растениями и почвенными микроорганизмами различается в зависимости от системы возделывания, и это, вероятно, является еще одним важным фактором, влияющим на поток корня C в ризосферных животных-потребителях, таких как Collembola. Травы и ивы образуют симбиотические ассоциации с микоризными грибами (Sumorok and Kiedrzynska 2007; Baum et al. 2009; Nicolson and Johnston 2009), и это может быть связано с более высокой экссудацией корней по сравнению с немикоризными растениями, такими как масличный рапс (Okubo et al. .2016). Высокое выделение C растения микоризными грибами и корневыми экссудатами, ассимилированными сапротрофными ризосферными микроорганизмами травы и ивы (Denef et al. 2007; Kušliene et al. 2014), вероятно, приведет к быстрому включению корневого C в потребителей ризосферы. Кроме того, микоризный и сапротрофный мицелий грибов эффективно переносит корень C из ризосферы в объемную почву без корней (Butler et al. 2003; Kušliene et al. 2014), облегчая захват корня C коллемболой. Напротив, включение корня C в животных-потребителей может быть затруднено из-за отсутствия микоризных ассоциаций у рапса (Kühn et al.2019). Это, вероятно, приводит к более неравномерному распределению корневого С в основной массе почвы, таким образом уменьшая включение полученного из корней С в коллемболу.

Инкорпорация ¹³ C в виды Collembola была значительно ниже у ивы, чем у травы и рапса. Потенциально низкое обогащение ивы было связано с большим количеством немеченого C во флоэме, что ослабляло сигнал ¹³ C, что приводило к более низким значениям Δ ¹³ C в коллемболе даже при включении такого же количества корня C, как в траве и изнасилование.В подтверждение этого предположения, обогащение корней ¹³ C (Таблица S1) и биомаркером PLFA 18: 2ω6,9 в почве также было ниже у ивы, чем у травы и рапса (Lingling Shi, неопубликованные данные). Хотя PLFA 18: 2ω6,9 происходит как из корней, так и из грибов, его тесная корреляция с другими грибковыми биомаркерами (Högberg 2006; Pausch et al. 2016) и тот факт, что в настоящем исследовании анализировалась только просеянная почва, позволяют предположить, что он преимущественно отражает грибковая ткань. Помимо эффектов разбавления, потеря ¹³ C через дыхание надземных частей или низкое подземное выделение недавнего фотосинтата C также могла способствовать низкому включению ¹³ C в коллемболу у ивы.

В отличие от участков травы и ивы, которые были заложены непосредственно с посевных площадей, участок изнасилования был создан с части травяного участка. Различия в предшествующей растительности могли повлиять на включение полученного из корней углерода в коллемболу из-за различного влияния на свойства почвы и микробные сообщества. Однако унаследованные эффекты предыдущей растительности предположительно были незначительными по сравнению с эффектами нынешних типов / видов растений и управления почвой. Например, Detheridge et al.(2016) показали, что грибное сообщество зерновых полей с разными предшествующими видами сельскохозяйственных культур сблизилось уже через год после закладки. Аналогичным образом Crotty et al. (2016) обнаружили, что унаследованное влияние предыдущих видов сельскохозяйственных культур на разнообразие и численность почвенной фауны уменьшилось во втором посевном сезоне во время севооборота, а численность коллембол больше не изменилась с предыдущими видами сельскохозяйственных культур.

В настоящем исследовании мы не смогли уловить вариации в подземном распределении углерода под влиянием периода роста.Поскольку наше исследование проводилось во время позднего периода роста масличного рапса, быстрый рост цветов и семян, вероятно, уменьшил приток углерода к корням и в пищевую сеть почвы, тогда как подземное выделение и включение углерода предположительно выше у рапса на раннем этапе роста. этапы (Пауш, Кузяков, 2018). В злаках изменение распределения углерода в зависимости от стадии роста относительно невелико по сравнению с однолетними культурами (Пауш и Кузяков, 2018), в то время как подземное поступление углерода от деревьев потенциально выше в поздний, чем в ранний период роста (Mordacq et al.1986; Kagawa et al. 2006; Högberg et al. 2010). Поскольку закономерности включения ¹³ C в Collembola потенциально различаются в разные периоды роста, в частности, для рапса и ивы, необходимы дальнейшие исследования сезонных колебаний в поступлениях подземного углерода в различные системы земледелия.

Включение корня C в функциональные группы коллембол

Функциональные группы коллембол отражают среду обитания, в которой они живут, такую ​​как подстилка, гумус и минеральная почва (Faber 1991; Ponge 2000; Rusek 2007), что позволяет сделать вывод о распределении корня -производный C в почвенных пищевых сетях на разной глубине почвы (Потапов и др.2016b). В отличие от нашей второй гипотезы, гемиэдафическая и эпедафическая коллембола содержала больше ¹³ C, чем эвэдафическая коллембола в рапсе и иве (рис. 4), что указывает на то, что обитающие в почве виды имеют ограниченный доступ к недавно зафиксированному C в этих системах возделывания. Это противоречит предыдущим выводам в лесах, где гемиэдафические коллемболы не были строго маркированы (Potapov et al., 2016a; Fujii et al. 2016), возможно потому, что они полагались на подстилку как на основной источник углерода в этих системах.Напротив, наши исследования проводились на пахотных почвах с относительно небольшим количеством подстилки; следовательно, гемиэдафическая коллембола может перейти от ресурсов подстилки к ресурсам корневого происхождения. Подобно результатам Scheunemann et al. (2015), гемиэдафический вид P. alba включал больше корневого углерода, чем эведафический вид P. armata .

Относительно низкое включение корневых ресурсов в эвэдафические виды рапса и ивы предполагает, что они в большей степени полагаются на старые источники углерода, т.е.е., органическое вещество почвы и подстилка, чем полу- и эпедафические виды в этих системах земледелия. Подтверждая этот вывод, Понг (2000) обнаружил, что некоторые виды эвэдафических животных преимущественно потребляют гумус, а не корневую ткань или гифы грибов. Кроме того, C старой почвы составлял более 50% тела C Collembola на кукурузных полях даже после длительного роста кукурузы (Albers et al. 2006; Scheunemann et al. 2010). Это подтверждается относительно высокими естественными значениями δ ¹⁵ N и δ ¹³ C эвэдафической коллемболы рапса и ивы (Таблица S4), которые соответствуют обогащенным значениям δ ¹⁵ N и δ ¹³ C для органическое вещество почвы по сравнению с растительным материалом (Hyodo et al.2010; Потапов и др. 2019). Однако высокие значения δ ¹⁵ N в Коллемболе могут также отражать трофическое фракционирование из-за того, что они занимают более высокие трофические позиции в пищевой сети (Chahartaghi et al. 2005).

В то время как включение полученного из корня C различается между функциональными группами у рапса и ивы, не было значительных различий между функциональными группами у травы (рис. 4). Это произошло главным образом из-за более высокого включения C, полученного из корней, в эведафические виды на пастбищах по сравнению с рапсом и ивой.Корни травы могут быть более вкусными, чем корни рапса и ивы. Это может быть особенно верно для P. armata , поскольку его естественная численность δ ¹³ C значения C снизились со сравнительно высоких значений для рапса и ивы до низких значений для травы (Таблица S4), что указывает на более прямую трофическую связь с корнями трав. , предположительно при питании корнями, арбускулярными микоризными грибами или нематодами, питающимися корнями. Предыдущие исследования также показали, что виды euedaphic Collembola смещают свои пищевые предпочтения с корня C на органический углерод почвы в зависимости от наличия ресурсов (Gillet and Ponge 2003; Endlweber et al.2009; Eerpina et al. 2017). Кроме того, высокое подземное выделение углерода в траве может способствовать его использованию различными функциональными группами Collembola, а также их микробной добычей.

Предыдущие исследования предполагают, что эпедафические виды потенциально имеют большое предпочтение к наземным ресурсам, таким как микроводоросли, лишайники и органическое вещество, депонируемое растениями, включая пыльцу и падель тлей (Scheunemann et al. 2010; Potapov et al. 2016a). Однако временное изменение значений Δ ¹³ C эпедафических и гемиэдафических видов в отдельных системах земледелия было синхронным с таковым для эведафических видов; так как виды euedaphic вряд ли будут связаны с наземными ресурсами, основной источник их недавно зафиксированного C, вероятно, будет происходить от корней.Хотя фотоавтотрофные микроорганизмы могут быть важным ресурсом для Collembola в верхних слоях подстилки или в экстремальных местах обитания, таких как поверхность скал (Потапов и др., 2018), их важность в присутствии корней растений остается неизвестной. Требуются дальнейшие исследования для разделения различных каналов недавно зафиксированного C на эпедафическую коллемболу.

Видовые различия во включении корня C

Функциональная группа могла лишь частично объяснить различия во включении ¹³ C в виды Collembola; виды внутри одной функциональной группы также различались по включению ¹³ C, что подтверждает нашу третью гипотезу.Примечательно, что вариация была наиболее выражена у euedaphic видов: P. armata содержал значительно больше корня C, чем S. denisi (рис. 5). В отличие от вариаций внутри эпедафических и гемиэдафических групп, это различие сохранялось в каждой из изученных систем земледелия, указывая на заметную дифференциацию ниш между эвэдафическими видами.

Сильная дифференциация ниш у euedaphic Collembola также наблюдалась Potapov et al. (2016a), которые обнаружили более высокую зависимость от корневых ресурсов у P.armata , чем в Isotomiella minor , а по Fujii et al. (2016), которые обнаружили включение C, полученного из корня, в Onychiurus flavescens , но не в I. minor . В то время как Protaphorura и Onychiurus относятся к семейству Onychiuridae, Isotomiella и Stenaphorura принадлежат к семействам Isotomidae и Tullbergiidae соответственно, характеризующиеся более тонкими телами, позволяющими проникать в более мелкие поры почвы. Таким образом, дифференциация ниш в euedaphic Collembola частично может быть объяснена морфологическими различиями внутри функциональных групп (Potapov et al.2016b).

Более выраженная дифференциация ниш в euedaphic Collembola потенциально указывает на более высокий спрос на разделение ресурсов в минеральной почве. Относительно стабильная среда в минеральной почве может способствовать эксплуатации ресурсов и, следовательно, конкуренции, способствуя дифференцированному использованию ресурсов, связанных с корнями и подстилкой / гумусом, среди эведафических видов. Напротив, ресурсы поверхностной почвы предположительно значительно различались между системами возделывания, и это, вероятно, способствовало изменчивому поглощению ¹³ C видов одной и той же функциональной группы эпедафической и гемиэдафической коллемболами.Например, содержание углерода ¹³ C у L. paradoxus было ниже, чем у других эпедафических видов у рапса, но сходно у травы и ивы.

Виды Collembola с низким содержанием ¹³ C предположительно меньше полагаются на полученный из корней C, но больше на другие немаркированные ресурсы, такие как органическое вещество почвы. Подтверждая это предположение, мы обнаружили, что включение ¹³ C в виды Collembola (значения Δ ¹³ C) отрицательно коррелирует с объемной тканью ¹³ C естественной численностью Collembola (значения δ ¹³ C) в рапсе и трава (рис.6). Это согласуется с предыдущими исследованиями, показывающими, что низкие значения δ ¹³ C отражают предпочтительное включение недавно установленной установки C; Напротив, высокие значения δ ¹³ C указывают на высокое включение углерода, происходящего из почвенного органического вещества и связанных с ним микроорганизмов (Потапов и др., 2016b, 2019). Интересно, что L. paradoxus у рапса имеет низкие естественные значения δ ¹³ C, но также низкое включение ¹³ C, в отличие от других эпедафических видов (рис.5, таблица S4). Кроме того, обогащение ¹³ C у L. paradoxus снизилось после того, как оно достигло пика на 7-й день. Это говорит о том, что, в отличие от других эпедафических видов, L. paradoxus включил недавно зафиксированный C от других фотоавтотрофов, кроме растений, предположительно водорослей или водорослей. цианобактерии.

Размер тела может быть еще одним фактором, влияющим на включение ¹³ C в виды Collembola, поскольку более мелкие виды с более высокой удельной массой метаболизма (Brown and Sible 2006) могут также иметь более высокую скорость включения ¹³ C, чем более крупные виды (Ларсен и др.2009 г.). Однако не было значительной корреляции между размером тела и включением ¹³ C в виды Collembola, что позволяет предположить, что диетическая дифференциация может играть более важную роль в управлении включением C, полученного из корня, чем размер тела. Хотя настоящее исследование не может предоставить подробную информацию о точных механизмах, ответственных за дифференциальное включение полученного из корней C в виды Collembola, например, при питании различными микроорганизмами, наши результаты предполагают, что дифференциальное использование базальных ресурсов может быть важным механизмом, благоприятствующим местным сосуществование видов Collembola.

Павлюченкова расстраивает Кузнецову, чтобы он сделал Открытые кварталы

The Daily Beast

Он официально поменял имя на злодея по облигациям. Потом он замышлял смерть отца, говорят копы.

Полиция Колорадо-Спрингс Прошлым летом бывший прокурор Колорадо-Спрингс Жан-Жозеф Данжер Ле Шиффр обнаружил, что он не был включен в завещание своего отца, и был явно в ярости. Таким образом, как утверждает полиция, он составил план вместе со своей мамой Марселлой Сандовал. Это, по его мнению, будет надежным. Ле Шиффр убьет своего отца, Гилберта Сандоваля, а его 78-летняя мать затем заявит, что сделала это в порядке самообороны.Марселла, разлученная с Гилбертом, стала бенефициаром своего мужа и пообещала разделить состояние с сыном, но 55-летний Ле Шиффр, который родился Патриком Джозефом Сандовалем и по закону сменил имя на злодея Бонда из казино Рояль за некоторое время до убийства, по-видимому, не рассчитывал, что две вещи пойдут не так. Кандидат в прокуратуру Филли вынужден обратиться к помощнику юриста, найденному мертвым в своем особняке На судебном слушании в пятницу, освещаемом The Colorado Springs Gazette, полиция изложила свое дело против Ле Шиффра. и Сандовал впервые, включая ошибки, которые в конечном итоге сбили пару.По данным полиции, в конце июля Ле Шиффр и Марселла осуществили свой план. Марселла уговорила своего бывшего мужа спуститься в подвал дома, которым они владели, где Ле Шиффр ждал с бейсбольной битой. Он якобы забил Гилберта до смерти. Полиция заявляет, что они обнаружили окровавленный потрескавшийся Луисвилл Слаггер рядом с его телом. После смерти отца Ле Шиффр ножом порезал руки своей матери, чтобы было похоже, что на нее напали. Он оставил нож рядом с телом отца.Но, как заявила полиция во время полудневного слушания в пятницу, следователи сразу же заподозрили подозрения, когда они прибыли на место убийства, и им пришлось физически сопровождать Марселлу по дому, потому что она была в таком плохом состоянии здоровья. — старая женщина забила мужчину до смерти бейсбольной битой и выдержала нападение с ножом, если она даже не могла встать самостоятельно? Затем, возможно, в рамках сделки о признании вины, Марселла обратилась против своего сына и решила стать государственным свидетелем. В своих показаниях в суде в августе она описала длительное планирование убийства.«Она устала от того, как Гилберт обращался с ней, была частью этого, а другая часть была финансовой — что мистер Ле Шиффр был исключен из завещания», — сказал в то время детектив Маркус Лемкуль. Убить новую подругу отчужденного мужа: защита Но, в другом повороте, общественный защитник Ле Шиффра предположил на пятничном слушании, что брат Ле Шиффра, бывший полицейский из Колорадо-Спрингс Марк Сандовал, проник в голову их мамы и манипулировал ее воспоминаниями о событиях. Его адвокаты также оспорили предполагаемый мотив, заявив, что Ле Шиффр все еще мог претендовать на долю наследства своего отца, и заявили, что не было никаких вещественных доказательств, связывающих его с местом происшествия.В конце пятничных слушаний судья Чад Миллер пришел к выводу, что существует достаточно доказательств, чтобы обвинить Ле Шиффра в убийстве первой степени, и приказал удерживать Ле Шиффра без залога. Ле Шиффр не признала себя виновной по всем пунктам обвинения: в рамках сделки с полицией Марселла Сандовал была обвинена в соучастии в убийстве. В прошлом году она признала себя виновной и ей грозит два года условно, согласно судебным документам. Подробнее читайте в The Daily Beast. Получайте наши главные новости каждый день в свой почтовый ящик. Зарегистрируйтесь прямо сейчас! Ежедневное членство в Beast: Beast Inside подробно рассказывает о важных для вас историях.Учить больше.

Биография Кузнецовой Николи. Битва Экстрасенсов: Николь Кузнецова

Новая звезда прошлого сезона «Битвы экстрасенсов» Николь Кузнецова , бывшая жена покойного известного авторитета Славы Япончик . Увлекательная биография Николь Кузнецова поражает своей яркостью.

О Николь Кузнецова впервые узнала в 1988 году в городе Москва, с конца 2000-х она также известна в определенных кругах, как и Агата Матвеева.Эти родители никому не известны, но сама Николь-Агата утверждает, что является дочерью одного из криминальных авторитетов. Однако достоверно известно, что она была женой Славы Япошки, вор в законе умер от перитонита. Теперь вы знаете, кто японец , жена .

Девушка считает себя «белой ведьмой» и утверждает, что в детстве пережила клиническую смерть, которая впоследствии стала катализатором развития у Николь экстрасенсорных способностей. Николь Кузнецова рассказывает о том, что когда ей было 15 лет, в ней появился наставник, который помог ей развить дар ясновидения.

Николь Кузнецова фото:

Николь Кузнецова и ее биография Сейчас они интересуют многих, потому что стали настоящей находкой для 16-го сезона телепрограммы «Битва экстрасенсов». Есть много сомнений в том, действительно ли Николь была женой японца, почему она говорит шепотом и постоянно носит шарф. Все эти сплетни легко опровергнуть, ведь эта умная девочка не скрывает, познакомилась и жила ли она с японцем и тем воспитала 4-летнего сына покойного.Николь Кузнецова познакомилась с японцем еще девочкой, ведь вор в законе был частым гостем в доме отца девушки, который, как она утверждает, тоже был криминальным авторитетом. Впоследствии япошка и стал ее будущим первым мужем.

Личная жизнь Николь окутана тайнами, как и сама девушка. Сейчас многие считают, что нынешняя Николь Кузнецова — это ведущий Александр Садоков, освещающий спортивные новости на Первом канале. Есть много фото, подтверждающих их связь, в прессе утверждается, что во втором браке был второй сын Николь Степан, младше Егора.

Также ясновидящая опровергает сплетни о том, почему она говорит шепотом. Ведь есть достоверные факты о множестве перенесенных операций, после которых врачи были вынуждены установить в горле трахеотомическую трубку, с помощью которой оно дышит. К сожалению, из-за этого устройства в трахее девушка может говорить только шепотом. По этой же причине он постоянно носит на шее самые разные шарфы и шали. А тем, кто утверждает, что все это просто пиар-ход, она молча показывает шею, чем размахивают всеми сомнениями.

Вот такая вдова известного японца Николь Кузнецова, это Агата Матвеева, это Ника Кузнецова, это Нина Матвеева. Яркая личность, очаровательная девочка, яркие экстрасенсы и мама двух замечательных мальчиков.

Биография и фото Николь Кузнецовой взяты с ее личной страницы в ВК.

32-летний ясновидящий с огненно-рыжими волосами стал не только одним из самых строгих участников «Битвы» в истории и цепях в России встреч, но и научился жить и радоваться с врожденным заболеванием дыхательных путей. .Количество перенесенных на Николь операций уже приближается к 300, и она вынуждена дышать через трахеостомическую трубку.

— В этом году вы не принимали участие в кастинге «баттл», хотя многие участники выходят на шоу два-три раза …

— Дело в том, что я не планировал идти на «бой» на все, а тем более хожу туда каждый год и доказываю, что заслуживаю второго места. Я человек без обид на проект и ни в коем случае не хочу делать то, чему учить свое эго, а кого-то что-то доказывать.Моя жизнь после проекта уже говорит сама за себя. Плюс на одном из телеканалов сейчас планируется моя передача, в которой я буду выступать в новом качестве ведущей. Теперь это вопрос времени.

— Интересная деталь: вы как-то сказали, что с возрастом ваши способности становятся сильнее …

— Как любой специалист с годами развивает свои способности. Это иллюзия, что человек рожден с неким колдовским даром и знает, какие ритуалы нужно совершать. Каждый новый человек на консультации для меня — это новый опыт.Сейчас, например, я овладел магией Таро, и уже есть договор о выпуске моей колоды карт. Другой вопрос, что у меня ухудшается самочувствие, и многие ограничения ставит мой врач. Но я его не слушаю, за что меня, конечно, постоянно ругает муж. Езжу с собой на гастроли всевозможные ингаляторы, ударные дозы обезболивающих, так как приготовления расписаны на год вперед. Но выходные — это только наше время с мужем и детьми. Едем на дачу, играем в монополию, лежим на диване.И, как вы заметили, у меня дома нет ничего удивительного. Я не приемлю волшебный образ жизни переносить в реальную жизнь.

Николь с мужем Александром Садоковым и сыновьями Егором и Степаном

«Старший сын Егора Энергера учился в 4-м классе, а младший обязательно готовится к школе». Есть ли помощники по дому, а может, помощник по работе?

Няня присматривает за детьми, когда мы с мужем (супруга Николь — спортивный комментатор Александр Садоков.- ок. Женский день) занята, тоже может что-нибудь приготовить или помочь с уборкой. В чем-то она заменяет нашу бабушку. Но плюс мальчики растут и становятся более самостоятельными! Недавно проснулась с мужем, а Егор (Николь 9 лет) уже приготовил завтрак и брату. Они оба сами выгуливают собак. И если я не могу быть с мальчиками, то я хочу пообщаться с ними сейчас. И будьте спокойны, что старший рассказывает сказку младшему, как я их учил, что они, взявшись за руки, ходят в магазин.В общем, без меня они не исчезнут.

Сначала таблица умножения, потом … Эстерсенсорика!

— А экстрасенсы у Сына развиваются? Вы сказали, что от старшего подарка еще рано было заметить …

Вот я строгая мама. И я считаю, что главное, чтобы мужчина получил хорошее образование, профессию. А потом волшебство. Я не слышу от него Гарри Поттера, Егор растет обычным мальчиком, который ходит в Капоэр, бегает по двору с друзьями, преподает уроки… Да, он, может, более чувствителен к эмоциям других людей, но в силу возраста не все понимает. А от младшего (младший сын Николь Кузнецова и Александра Садокова Степан — 5,5 лет) Муж мечтает о подрастающем хоккеисте, боксере или футболисте.

— А кто в семье «строгий милиционер»? Вы или муж?

Муж на детей никогда не кричит. Я его совсем не слышала, чтобы он повысил голос … Могу быть строгим, если мне что-то не нравится.Я вообще достаточно жесткий человек. И хоть у меня нет голоса (Николь может говорить только шепотом. — Ред. Ред.), У меня живая сказка. Я достаточно вижу — и сыновья уже знают, что они сделали что-то не так … Когда я поддерживаю, я восстанавливаюсь после очередной операции, они также знают, что маме нужна помощь. Сделай мне чаю, принеси подушки. Но опять же, я не хочу проводить все свои выходные, поэтому, если муж водит детей в кино, я буду только рада. У мальчиков не должно быть воспоминаний о детстве с мамой, вечно страдающих на диване…

Николь часто путешествует, но любимая страна — Испания, где квартира ясновидящего

— Почти 300 операций … Вашей силе позавидует любой олимпийский чемпион. Что вы говорите после каждого и, главное, что придает силы улыбаться?

Когда вы не можете дышать, вы сами проходите операцию и просите сделать ее быстро. Но ведь у меня есть семья, которая не должна от этого страдать. И я «максимально встряхиваюсь от тяжелого состояния. И когда мы все забираемся на диван, обнимаемся и смеемся, я понимаю, что это того стоит сильных сторон: хирургических вмешательств и обезболивающих.Ну плюс, если бы я не рожала детей, я была бы достаточно здоровым человеком. В то же время сейчас я бы ничего не стал менять в своей жизни. За первую беременность перенесла 10 операций без наркоза и все же решилась на вторую … Вторая была не такой уж и гладкой. И уже на шестом месяце Цезарево был не связан со мной в первой больнице, куда мне удалось доставить скорую … Меня так неровно зашили, что начался жуткий порыв. Сутс, я уже дома пинцетом стрелял.И даже сейчас, пройдя через все это, не оставила мечту дочери. И я думаю, что чем старше вырастет, мы с мужем будем тесно сотрудничать.

«После« боя »муж пригрозил сжечь меня на костре»

— Неужто после стольких пластических операций и думать не хочется?

Я достаточно спокоен к анестезии и не верю, что на одну общую анестезию уходит 7 лет жизни … Не скрывайте, что я сделала коррекцию носа и груди.При этом мужу изначально досталось увеличение груди примерно так же, как и мое участие в «Битве». Перед кастингом на шоу он пригрозил сжечь меня у костра, а большой бюст посчитал прихотью и сказал, что бросит. Мол, я буду слишком красивой. Но теперь он любит меня еще сильнее. Мы вместе с ним размышляем: у нас в семье «умный и некрасивый» есть он и «красивый и глупый» — это я, но я все еще Кузя и обезьяна, поэтому арсенал ников богатый.И шутки, шутки, но именно такие «насмешки» над другими помогают избежать многих конфликтов в семье. Здесь вы уже все рассказали, а ругаться совершенно неохотно.

— Муж спортивный комментатор, вы тоже личный человек … Бывает ли с этой почвой? Как вы относитесь к успехам друг друга?

Это исключено. Разве это смех, что мужу уже пять лет в эфире, а автографы у меня берут … А так супруга моя гордость, самый близкий для меня человек.Когда я сомневаюсь или расстраиваюсь, он может подобрать правильные слова, чтобы утешить и вселить надежду. Хотя у нас с ним была забавная история: когда я только познакомилась с Сашей, он буквально убегал от него и кричал: «Не беспокойся, я ищу мужа». Я чувствовал, что собираюсь жениться, но не знал, что это будет … Он!

На телеканале ТНТ каждую субботу вечером выходят новые 16 сезонов Популярная телекомпания Битва экстрасенсов. На этот раз участники не похожи друг на друга и борьба за победу не шуточная.Black I. White Magic, некроманты, вепсы, варрены и гадалки собрались вместе, чтобы доказать свои экстрасенсорные способности.

Одна из представительниц клана Белая Магия Николь Кузнецова Поразила телезрителей и всем понюхала. Николь мало рассказывает о себе и ее биография похожа на тайну, покрытую тьмой. Именно это вызвало множество слухов и сплетало вокруг этой красивой рыжеволосой ведьмы. На сегодняшний день Николь всего 27 лет, она замужем и имеет два имени.Второе ее имя Агата. Она очень творческий человек с открытой и чистой душой. Сейчас Николь состоит во втором браке, а его первой супругой был криминальный авторитет японец. После него Николь осталась их общим сыном. У Николь Кузнецова непростая судьба — смерть первого супруга, две клинические смерти, тяжелая болезнь и последующая операция — это лишь доля того, что молодой ведьме удалось выжить.

Парадокс, казалось бы, ясновидящий может помогать другим и исцелять их от сложных болезней, а сами они не могут защитить себя.Последствия болезни остались в Николь на всю жизнь — ей в горле установили трубку-трахею. Такой прибор ставится при раке гортани и тогда человек приобретает способность полноценно продолжать жить. Но именно эти события необычайно повлияли на Николь, и она обнаружила наличие экстрасенсорных способностей. Начав развивать это в себе и раскрывать изнутри, Николь Кузнецова поняла, что он настоящая белая ведьма. На битву экстрасенсов Николь, по ее словам, пришла сравнить свои экстрасенсорные способности, сравнить свои экстрасенсы и оценить возможности других экстрасенсов и также возможно открыть новые горизонты.

На сегодняшний день Николь входит в число потенциальных финалистов 16-го сезона. Ее главными конкурентами с женской стороны являются две черные ведьмы и , а с мужской стороны с Николь соревнуется маг и демонолог Нартер Эндзигал . Конечно, среди представителей черной магии Николь Кузнецова выглядит светлой в темноте. Она успешно проходит все испытания, до сих пор не получает белых конвертов, и, как она уже однажды сообщила, она привыкла к этому и не отчаивается.Николь относится к своим конкурентам и часто восхищается результатами их тестов. Каждой своей победе и каждому успеху Николь посвящает сына. И не мотор для сильной конкуренции, он вовсе не пытается помешать своим коллегам по битве экстрасенсов. Напротив, Николь искренне аплодирует победам и искренне грустит, когда очередная участница по решению жюри получает черный конверт.

Звезда прошлого сезона «Битвы экстрасенсов» Николь Кузнецова

бывшая жена покойного известного авторитета славы Япончик. Увлекательная биография Николь Кузнецовой поражает своей яркостью.

О Николь Кузнецова впервые узнала в 1988 году в городе Москва, с конца 2000-х она также известна в определенных кругах, как Агата Матвеева. Настоящие родители никому не известны, но сама Николь-Агат утверждает, что является дочерью одного из криминальных авторитетов. Однако точно известно, что она была женой Славы Япошки, вора в законе, умершей от перитонита.Теперь вы знаете, кто жена японца.

Девушка считает себя «белой ведьмой» и утверждает, что в детстве пережила клиническую смерть, которая впоследствии стала катализатором развития экстрасенсорных способностей Николь. Николь Кузнецова рассказывает о том, что когда ей было 15 лет, в ее биографии появился наставник, который помог ей развить дар ясновидения.

Николь Кузнецова фото:

Николь Кузнецова и ее биография Сейчас они интересуют многих, ведь она стала настоящей находкой для 16 сезона «Битвы экстрасенсов».Есть много сомнений в том, действительно ли Николь была женой японца, почему она говорит шепотом и постоянно носит шарф. Все эти сплетни легко опровергнуть, ведь эта яркая девочка не скрывает, как познакомилась и жила с японцем, а теперь воспитывает 4-летнего сына с покойного. Николь Кузнецова познакомилась с японцем еще девочкой, потому что вор в законе был частым гостем в доме отца девушки, который, как она утверждает, тоже был криминальным авторитетом. Впоследствии япошка и стал ее будущим первым мужем.

Личная жизнь Николь окутана тайнами, как и сама девушка. Сейчас многие считают, что нынешний ее мужа Николь Кузнецова — это ведущая Александра Садокова, которая освещает спортивные новости на Первом канале. Есть много фотографий, подтверждающих их связь, в прессе утверждается, что именно во втором браке у Николь появился второй сын Степан, в возрасте от Егора.

Также ясновидящая опровергает слухи о том, почему говорит шепотом. Ведь есть достоверные факты о множестве перенесенных операций, после которых врачи были вынуждены установить в горле трахеотомическую трубку, с помощью которой оно дышит.К сожалению, из-за этого устройства в трахее девушка может говорить только шепотом. По этой же причине он постоянно носит на шее самые разные шарфы и шали. А тем, кто утверждает, что все это просто пиар-ход, она молча показывает шею, чем все сомневается.

Вот такая вдова известного японца Николь Кузнецова, это Агата Матвеева, это Ника Кузнецова, это Нина Матвеева. Яркая личность, очаровательная девочка, впечатляющий экстрасенс и мать двух замечательных мальчиков.

Биография и фото Николь Кузнецова, Взято с его личной страницы в ВК.

Николь Кузнецова без трубки в горле в программе НТВ ЧП, расследование видео.

— Неординарная и яркая личность, экстрасенс, вдова криминального авторитета японца.

Коренная москвичка, свет появился 15 сентября 1988 года. Однако дата ее рождения, а также принадлежность ее семьи к «Преступной трясине» до сих пор остаются недоказанными.В биографии этой женщины много неразгаданных секретов и различных нестыковок.

Детство и семья

По некоторым данным, мать Николь была подполковником полиции, но отец действительно является одним из криминальных авторитетов. Другие источники предполагают, что Николь вообще увеличилась в криминальной среде. Ни одного другого факта сама Николь не отрицает. И вообще она не любит рассказывать подробности своей биографии.

Сама Николь Кузнецова пишет, что родилась она не в 1988 году, а в 1985 году, не в сентябре, а в августе.И сейчас ей не 30 лет, а 33 года. Также она пишет, что родители забрали ее ребенка из дома, где ее оставили биологические родители из-за врожденного респираторного заболевания.

Она была довольно обеспокоенным ребенком — ее даже выгнали из школы за плохое поведение. Но любовь и терпение приемных родителей Помогли ей перенести все его болезни. Из-за болезни Николь два раза попадала в клинику.

Ходят слухи и о том, что Николь воспитывалась в доме приемных родителей, так как настоящие отвергнутые девочки еще в младенчестве, когда был установлен сложный диагноз и стало известно, что для того, чтобы справиться со страшными заболеваниями, придется потратить немало времени, сил и денег.

Так или иначе, но то, что ее гражданским мужем был японец, с которым она была знакома с детства и от которого у него есть сын, остается фактом. И постоянное нахождение в криминальной среде, в которой господствуют собственные, достаточно строгие законы, не могло не наложить свой отпечаток на характер и жизненные принципы Николь.

Привыкла не бояться проблем, сама принимать решения и не отступать перед трудностями.

Тихоокеанский внешний вид

Известной широкой публике Николь стала после участия в 16-м сезоне Мистического Шоу «Битва Экстрасенсов», которое представляет известный Скептик Сергей Сафронов.К слову, само появление Николь на экранах было уже нестандартным, ведь при первом знакомстве с ведущей она говорила шепотом.

Николь почти всегда появляется в красиво завязанном шарфе или шейном платке и говорит исключительно шепотом. На вопрос «Почему?» Она ответила, что у нее серьезное неизлечимое заболевание, требующее постоянного вмешательства врачей. А в горле есть трубка, с помощью которой она может спокойно дышать и разговаривать.

В этом Ток-шоу Кузнецова заняла третье место. В том же году она занимается открытием своей школы, которая называется Центр правильной магии. Там она учит всех, кто интересуется обретением способности видеть будущее. В следующем году Николь отправляется в «волшебное турне» по нашей стране и ближнему зарубежью.

В 2017 году Кузнецова снова успешно проходит кастинг на участие в проекте «Экстрасенсы расследуют. Битва сильнейших». И самая главная новость о Николь — 3 июля этого года в соцсетях она поделилась радостной новостью — ей удалили трахесты и все зашили.Теперь она может свободно дышать и говорить голосом, а не шепотом.

Белая ведьма

Свои экстрасенсорные способности Николь обнаружила рано — в возрасте около 15 лет. Сама Николь считает, что это так или иначе связано с состояниями клинической смерти в детстве. Да и сами обстоятельства, которыми была названа клиническая смерть, Николь также не спешила делиться с широкой публикой.

Однако она упомянула, что эзотерические учения не постигаются независимо.У нее был духовный учитель, который оказал сильное влияние на формирование ее как мага. Имя учителя она не раскрывает. Он рассказывает лишь о том, что на первых порах было решено иметь дело только с белой магией и использовать свой дар только для помощи людям.

В испытаниях битвы Николь проявила себя как талантливый экстрасенс и с легкостью и уверенностью даже в очень сложных испытаниях, на которые не смогли справиться многие участники. К тому же яркая и интересная участница покорила публику своим шармом и прямотой.

Криминальное прошлое

Но задолго до того, как Николь появилась на телеэкранах, она стала широко известна в родных по криминальным кругам. В том мире она была известна как талантливая мошенница Агата Матвеева, которая проводила виртуозные операции и практически всегда оставалась безнаказанной.

Красивая и обаятельная, она легко вошла в доверие у пенсионеров, потом попросила сдачи крупной суммы, при этом узнав, где хранятся деньги для информации бандитам, которые легко осуществляли кражи.Однако в 2005 году удача отвернулась от девушки, и все же она попала в колонию, от которой быстро насытилась благодаря профессиональной работе юристов.

Но, поскольку Николь появилась в этих сериях под другим именем, а сама она категорически отрицает свою причастность к подобным событиям, этот факт, как и многие другие моменты ее биографии, тоже остается недоказанным.

Личная жизнь и муж Николь Кузнецова

После трагической гибели своего первого мужа япошки Николь достаточно долго подавляли и беспокоили.Сама она говорит, что он предчувствовал его клеветническую смерть и неоднократно предупреждал его об этом. Но, во-первых, на ее слова никто не обратил внимания, а во-вторых, она сама знала, что не может изменить то, что было определено судьбой.

Через некоторое время я познакомился и стал встречаться с телеведущим спортивных программ Александром Садоковым, который вскоре сделал ей предложение. В новом браке Николь родила второго сына и обрела спокойное семейное счастье.

Сегодня Николь активно занимается помощью людям в разрешении сложных жизненных ситуаций.Также возможно обращение за помощью — изготавливает различные амулеты и талисманы, снимает порчу и проклятия, привороты. Она сразу предупреждает своих клиентов о том, что не совершает ритуалов, которые могут навредить физическому или психическому здоровью кого бы то ни было.

Неоадъювантная химиотерапия изменяет популяции опухолей молочной железы для регулирования лекарственной реакции и развития метастазов

Abstract

Опухоли груди имеют свою собственную специфическую микробиоту, отличную от нормальной ткани молочной железы.Пациенты с раком груди с местнораспространенным заболеванием часто проходят неоадъювантную химиотерапию для уменьшения размера опухоли перед операцией, чтобы сохранить грудь или ограничить диссекцию подмышечных лимфатических узлов. Целью нашего исследования было оценить, модулирует ли неоадъювантная химиотерапия микробиом опухоли и потенциальное влияние микробов на передачу сигналов рака груди. Используя мгновенно замороженную асептически собранную ткань опухоли молочной железы у женщин, прошедших неоадъювантную химиотерапию ( n = 15), или женщин без предшествующей терапии во время операции ( n = 18), мы выполнили секвенирование 16S рРНК для выявления опухолевых бактерий. населения.Мы также окрашивали микроматрицы опухоли груди, чтобы подтвердить наличие идентифицированной микробиоты. Используя среду, кондиционированную бактериями, мы определили влияние бактериальных метаболитов на пролиферацию клеток рака молочной железы и чувствительность к терапии доксорубицином. Мы показываем, что введение химиотерапии значительно увеличило опухоль груди Pseudomonas spp . Первичные опухоли молочной железы от пациентов, у которых развились отдаленные метастазы, показали повышенное количество опухолей Brevundimonas и Staphylococcus .Мы подтвердили присутствие Pseudomonas в ткани опухоли молочной железы путем окрашивания ИГХ. Обработка клеток рака молочной железы кондиционированной средой Pseudomonas aeruginosa по-разному влияла на пролиферацию дозозависимым образом и модулировала опосредованную доксорубицином гибель клеток. Наши результаты показывают, что химиотерапия меняет микробиом опухоли груди, а конкретные микробы коррелируют с рецидивом опухоли. Дальнейшие исследования с большей группой пациентов могут дать более полное представление о роли микробиоты в терапевтических результатах и ​​разработать новые бактериальные биомаркеры, которые могут предсказать отдаленные метастазы.

Последствия: Микробиота опухоли молочной железы изменяется под воздействием терапии и влияет на молекулярную передачу сигналов.

Введение

Предыдущие исследования выявили наличие специфического микробиома груди (1–5). Образцы молочной железы, полученные от канадских или ирландских женщин, перенесших лампэктомию, мастэктомию или операцию по уменьшению груди, показали различия в таксонах бактерий. Ткань молочной железы канадских женщин имела высокое пропорциональное содержание Bacillus, Acinetobacter, Enterobacteriaceae, Pseudomonas, Staphylococcus, Propionibacterium и Prevotella .По сравнению с образцами молочных желез из Канады, ткань молочной железы ирландских женщин показала высокий уровень Listeria welshimeri , более чем в 3 раза более высокую численность Enterobacteriaceae , в 2 раза более высокую численность Staphylococcus и в 2 раза более высокую численность Propionibacterium . . Образцы молочных желез от ирландских и канадских женщин показали одинаковую (5–6%) численность таксонов на уровне рода Pseudomonas (1).

Другое исследование, посвященное изучению микробиома нормальной ткани молочной железы по сравнению с опухолью молочной железы, прилегающей к ткани молочной железы, показало повышенное относительное содержание Staphylococcus в ткани молочной железы больных раком.В этом исследовании не учитывалась масса тела пациента (2). В другом исследовании сообщалось об индексе массы тела пациента (ИМТ), ткани молочной железы были получены рядом с доброкачественными или злокачественными опухолями груди, а ткань молочной железы была секвенирована для выявления изменений в микробиоте. В ткани молочной железы пациентов со злокачественным заболеванием снижен уровень Lactobacillus , что позволяет предположить, что онкогенез молочной железы может изменять микробиоту молочной железы (6). Недавно наша группа продемонстрировала пластичность микробиома молочной железы, используя диетический подход на модели нечеловеческих приматов.Мы показали, что у обезьян, потребляющих средиземноморскую диету, популяции микробиоты груди явно отличаются от популяций обезьян, потребляющих западную диету, которая регулируется независимо от микробиома кишечника и системных эффектов (5).

Опухоли груди также демонстрируют отличную популяцию микробиоты по сравнению с тканью молочной железы. Прилегающая к доброкачественной опухоли ткань ( n = 72) и опухоль груди ( n = 668) были собраны данные атласа генома рака и неперекрывающиеся последовательности были сопоставлены с бактериальными геномами (7).Бактериальные рибосомные гены 16S были идентифицированы из этих неперекрывающихся последовательностей и количественно определены преобладающие бактериальные популяции (критерии исключения включали: рак груди у мужчин, лечение неоадъювантной химиотерапией, образцы метастазов и предшествующий рак груди в анамнезе). Ткань опухоли была обогащена бактериями из типа Proteobacteria по сравнению с доброкачественной прилегающей тканью. В этом исследовании также не изучалось влияние массы тела пациента на популяции опухолевых микробов. Другое исследование, в котором была выделена ДНК и выполнено секвенирование 16S из зафиксированных формалином, залитых парафином опухолей молочной железы (ER + n = 50, HER2 + n = 34 и тройной отрицательный n = 40) и нормальной ткани после операций по уменьшению груди. ( n = 20) указывают на повышенный уровень протеобактерий в образцах опухолей и специфические изменения в популяциях бактерий по подтипам (8).Это исследование не имело доступа к деидентифицированным данным и не могло коррелировать популяции бактерий опухоли груди с ИМТ или безрецидивной выживаемостью.

Неоадъювантная химиотерапия, обычно комбинация антрациклина [адриамицина или доксорубицина (DOX)], алкилирующих агентов (циклофосфамид) и таксанов (таксотер), часто используется у пациентов с местнораспространенным раком молочной железы для уменьшения размера опухоли и ограничения поражения лимфатических узлов. перед операцией, чтобы сделать возможной консервативную операцию на груди и минимизировать операцию в подмышечной впадине (9, 10).Неизвестно, может ли химиотерапия модулировать микробиоту опухоли груди. Более того, не установлено, влияют ли популяции опухолевых бактерий на терапевтическую чувствительность или на развитие отдаленных метастазов.

Чтобы определить, влияет ли химиотерапия на микробиоту опухоли молочной железы, мы получили быстро замороженные асептически собранные опухолевые ткани у пациентов с раком молочной железы, которые прошли неоадъювантную химиотерапию, или опухолей у женщин, не прошедших предшествующую терапию во время операции. Наш набор образцов имеет клиническую аннотацию, позволяющую коррелировать популяцию первичной опухолевой микробиоты с рецидивом опухоли и ожирением.Наши данные показывают, что неоадъювантная химиотерапия увеличивала численность опухолевых популяций Pseudomonas и уменьшала популяции Streptococcus . Развитие отдаленных метастазов коррелировало с увеличением количества первичных опухолей Brevundimonas и Staphylococcus . Кроме того, используя набор образцов микрочипов вторичной опухоли молочной железы, мы подтвердили наличие Pseudomonas с помощью IHC. Мы также использовали кондиционированную среду Pseudomonas aeruginosa , чтобы продемонстрировать дифференциальную активацию молекулярной сигнализации в клетках рака молочной железы в зависимости от концентрации секретируемых бактериями метаболитов, влияющих на рост клеток, апоптоз и чувствительность к химиотерапии.Взятые вместе, эти данные предполагают, что присутствуют отдельные популяции внутриопухолевой микробиоты и что состав бактериальных популяций может быть изменен терапией, чтобы повлиять на передачу сигналов клеток рака молочной железы и реакцию на лекарства.

Материалы и методы

Утверждение исследования и закупка ткани опухоли молочной железы

Это исследование было одобрено нашим институциональным наблюдательным советом (IRB00045734) в соответствии с правилами HHS для защиты субъектов исследования.Ретроспективно в базе данных Sentinel Lymph Node Mapping and Surgical Outcomes (IRB00008131) были определены субъекты женского пола с диагнозом инвазивная протоковая карцинома. Для включения субъектов в исследование они должны предоставить письменное согласие для расширенного банка опухолей / тканей (BG04-104) и иметь опухолевую ткань для исследования в банке опухолей. Также были собраны демографические данные пациентов, предоперационные переменные, хирургические данные и клинические исходы. Характеристики пациентов описаны в таблице 1.Образцы опухоли груди, предоставленные нам патологом в OR Path Lab в течение 45–60 минут после операции, мгновенно замораживаются. Обозначение опухоли или нормы определяется путем визуального осмотра патологом до того, как образцы опухоли будут отправлены в банк опухолей.

Таблица 1.

Пациентка с раком груди.

Экстракция ДНК, ПЦР, секвенирование 16s рРНК и обработка данных

Образцы опухоли груди ( n = 33) помещали в планшет MoBio PowerMag для выделения ДНК почвы.ДНК экстрагировали в соответствии с протоколом производителя. Бактериальное секвенирование 16S, анализ данных и интерпретация были выполнены Microbiome Insights. Бактериальные гены 16S рРНК амплифицировали с помощью ПЦР с праймерами с двойным штрих-кодом, нацеленными на область V4, в соответствии с методами, описанными в ref. 11. Ампликоны секвенировали с помощью Illumina MiSeq с использованием набора парных концов 250 пар оснований (v.2). Последовательности были таксономически классифицированы с использованием справочной базы данных Greengenes (v.13_8) и сгруппированы в операционные таксономические единицы (OTU) 97% -ного сходства с mothur (v.1.39.5) (12), следуя рекомендованной процедуре (https://www.mothur.org/wiki/MiSeq_SOP). Возможность контаминации была устранена путем совместного секвенирования ДНК, амплифицированной из образцов, и из четырех контрольных образцов, не содержащих матрицы, и реагентов из набора для экстракции, обработанных таким же образом, как и образцы. Также были включены два положительных контроля, состоящих из клонированной ДНК SUP05 (количество копий = 2 × 10 ⁶ ). Образцы с количеством ОТЕ менее 100 были исключены из анализа.

Для оценки бета-разнообразия по выборкам мы исключили OTU, встречающиеся менее чем в 10% выборок с количеством меньше трех, и рассчитали индексы Брея – Кертиса.Мы визуализировали бета-разнообразие, подчеркивая различия между выборками, используя неметрическую многомерную ординацию. Изменчивость в структуре сообщества оценивалась с помощью многофакторного многофакторного дисперсионного анализа с группой лечения в качестве основного фиксированного фактора. Все анализы проводились с использованием программного обеспечения R. Пропорциональная численность отобранной микробиоты была построена на графике, и было выполнено несколько непарных тестов t (с поправкой на множественные сравнения с использованием метода Холма-Сидака), и было использовано значение P ≤ 0.05 считали статистически значимым.

IHC

Был приобретен тканевый микрочип (ТМА), состоящий из нормальной ткани молочной железы ( n = 10), ткани первичной опухоли молочной железы ( n = 50) и метастазов в лимфатические узлы ( n = 40). от US Biomax, Inc. (номер в каталоге BR1008a). ТМА окрашивали против антитела P. aeruginosa (Abcam; каталожный номер ab68538) в разведении 1: 100 с использованием набора для окрашивания Dako Envision Plus IHC.

П.aeruginosa кондиционированная среда

P. aeruginosa (ATCC 27853) культивировали в течение ночи в триптическом соевом бульоне при 37 ° C в орбитальном шейкере. Среду вращали со скоростью 1000 об / мин в течение 10 минут для осаждения P. aeruginosa , которую отбрасывали. Супернатант фильтровали с использованием одноразовой вакуумной системы фильтрации Corning с размером пор 0,22 мкм любых бактериальных частиц. Среды хранили при 4 ° C и использовали в течение 24-48 часов после сбора урожая.

Получение клеточной линии и условия роста

Клеточные линии рака молочной железы MDA-MB-231, 4T1 и ZR-75-1 были ранее приобретены в ATCC.Клеточная линия 67NR была щедро предоставлена ​​доктором Андреа Мастро из Университета штата Пенсильвания (Государственный колледж, Пенсильвания). Клетки клона 2 MCF7 были получены от доктора Роберта Кларка из Джорджтаунского университета (Вашингтон, округ Колумбия). MDA-MB-231 клетки тройного отрицательного рака молочной железы (TNBC) человека, клетки TNBC мыши 4T1, клетки рака молочной железы ER + ZR-75-1 человека и клетки рака молочной железы ER + мыши 67NR выращивали в среде RMPI с 10% FBS при 37 ° C. ° C (базальные условия роста). Клетки рака молочной железы человека MCF-7 ER + выращивали в среде DMEM с 10% FBS при 37 ° C (основные условия роста).Клетки пассировали в течение приблизительно 3 месяцев, прежде чем новый клеточный фонд был получен из хранилища жидкого азота. Клеточные линии 4T1 и MDA-MB-231 в последний раз были аутентифицированы IDEXX BioAnalytics с использованием анализа коротких тандемных повторов в ноябре 2018 года. Было подтверждено, что 4T1 имеет мышиное происхождение, и межвидовой контаминации от млекопитающих обнаружено не было. Было подтверждено, что MDA-MB-231 имеет человеческое происхождение, и не было обнаружено межвидового заражения. 100% идентичность клеток MDA-MB-231 соответствует клеточной линии происхождения.Загрязнение Mycoplasma измеряли в супернатанте среды для культивирования клеток с помощью ПЦР. Последовательности праймеров являются следующими: CGCCTGAGTAGTACGTTCGC; CGCCTGAGTAGTACGTACGC; TGCCTGAGTAGTACATTCGC; TGCCTGGGTAGTACATTCGC; CGCCTGGGTAGTACATTCGC; CGCCTGAGTAGTATGCTCGC; GCGGTGTGTACAAGACCCGA; GCGGTGTGTACAAAACCCGA; GCGGTGTGTACAAACCCCGA.

Измерение клеточного индекса in vitro

Клетки рака груди (5 × 10 ⁵ ) помещали в систему ACEA xCELLigence на 24 часа перед обработкой 5%, 10% или 20% P.aeruginosa в кондиционированной среде (P-CM) в течение дополнительных 48 часов. В другой серии экспериментов клетки рака груди высевали в систему ACEA xCELLigence на 24 часа перед обработкой 10% или 20% P-CM ± 1 мкг / мл доксорубицина в течение дополнительных 48 часов. Индекс клеток измеряли по электрическому импедансу каждые 6 часов.

In vitro P. aeruginosa Измерение индекса замещающих клеток метаболита

Клетки MDA-MB-231 (5 × 10 ⁵ ) в основных условиях роста клетки помещали в систему ACEA xCELLigence на 24 часа перед обработкой 10 мкг / мл пиоцианина (каталожный номер.R9532; Sigma-Aldrich), 10 мкг / мл лектина (номер в каталоге L9895; Sigma-Aldrich), 10 нг / мл экзотоксина A (номер в каталоге P0184; Sigma-Aldrich), 10 мкг / мл фосфолипазы D (номер в каталоге P0065; Sigma-Aldrich) или 1 мкг / мл липополисахарида (LPS; каталожный номер L9143; Sigma-Aldrich) ± 1 мкг / мл доксорубицина в течение дополнительных 24 часов. Индекс клеток измеряли по электрическому импедансу каждые 6 часов.

Вестерн-блот-гибридизация

Клетки MDA-MB-231, 4T1, MCF7 и ZR-75-1 высевали на 24 часа перед обработкой 5%, 10% или 20% P-CM ± 1 мкг / мл доксорубицина. на дополнительные 24 часа.Обработанные клетки собирали в буфере RIPA, белок фракционировали по размеру с помощью гель-электрофореза и переносили на нитроцеллюлозную мембрану. Мембраны блокировали в блотто в течение 30 минут, затем инкубировали в течение ночи при 4 ° C с первичными антителами [pAkt Ser473, Akt (общее), расщепленной каспазой-7 и β-актином от Cell Signaling Technology, разведение 1: 1000]. На следующий день мембраны промывали и инкубировали с поликлональными вторичными антителами, конъюгированными с пероксидазой хрена. Иммунореактивные продукты визуализировали с помощью хемилюминесценции (SuperSignal Femto West; Pierce Biotechnology) и количественно определяли денситометрией с использованием программного обеспечения цифровой денситометрии Bio-Rad.Вестерн-блоттинг показан на рисунках в виде обрезанных изображений.

Результаты

Неоадъювантная химиотерапия приводит к сдвигу микробиоты опухоли

Бактериальная нагрузка, измеренная с помощью кПЦР, нацеленной на область V4 гена 16S, указывает на схожие уровни общих бактерий у нелеченных и леченных неоадъювантной химиотерапией пациентов (рис. 1A), демонстрируя, что введение химиотерапии не снижает общее присутствие бактерий в опухолевой ткани. Однако анализ разнообразия микробиоты (индекс Шеннона) показывает, что проведение неоадъювантной химиотерапии значительно снижает разнообразие бактерий в опухоли (рис.1Б). Численность OTU была агрегирована на основе организации на уровне рода и сгруппирована по лечению [нелеченные ( n = 18) по сравнению с неоадъювантной химиотерапией ( n = 15)]. Относительное количество родов бактерий в различных образцах опухолей визуализируется столбчатыми диаграммами. Каждая полоса представляет собой одну опухоль, а каждая цветная рамка — таксон бактерий. Высота цветного поля показывает относительную численность этого организма в образце (рис. 1C). Анализ пропорционального количества филумов показывает, что опухоли от пациентов, получавших неоадъювантную химиотерапию, не обнаруживают какой-либо значительной регуляции бактерий на уровне классификации филумов (рис.1D). Однако анализ различий на уровне родов указывает на значительное увеличение численности опухоли Pseudomonas (рис. 1E) и снижение численности опухоли Prevotella (рис. 1F) у пациентов с раком груди, получавших неоадъювантную химиотерапию.

Рисунок 1.

Неоадъювантная химиотерапия модулирует микробиоту опухоли груди. Результаты секвенирования опухоли 16S были сгруппированы по тому, получал ли пациент неоадъювантную химиотерапию перед окончательной операцией ( n = 15) или был ли пациент перенес операцию первым ( n = 18). A, Общую бактериальную нагрузку количественно оценивали с помощью 16S RT-PCR и отображали как 16S копий на мкл ДНК. Неоадъювантная химиотерапия не изменила общий уровень бактерий в опухоли. B, Шенноновское разнообразие. Неоадъювантная химиотерапия значительно снизила бактериальное разнообразие в опухоли. C, Относительное количество родов бактерий в различных образцах опухолей визуализируется столбчатыми диаграммами. Каждая полоса представляет собой одну опухоль, а каждая цветная рамка — таксон бактерий. Высота цветного поля показывает относительную численность этого организма в образце.«Другой» представляет таксоны с меньшей численностью. Примерно 25% общей микробиоты опухолей состоит из 105 таксонов на уровне рода с пропорциональной численностью менее 1%. D, Первичные опухоли молочной железы у пациентов, получавших неоадъювантную химиотерапию, не демонстрируют различий в широком спектре пропорциональных количеств уровня бактериального типа. На уровне рода опухоли, обработанные неоадъювантной химиотерапией, имеют повышенную пропорциональную численность таксонов Pseudomonas ( E ) и пониженную численность таксонов Prevotella ( F ) по сравнению с необработанными опухолями молочной железы.*, P <0,05, и столбцы ошибок показывают распределение от минимума до максимума.

Специфическая микробиота первичной опухоли коррелирует с отдаленными метастазами

У пациентов с метастазами не наблюдалось значительных различий в бактериальной нагрузке (рис. 2A), разнообразии Шеннона (рис. 2B) или пропорциональной численности на уровне филумов (рис. 2D). . Мы объединили численность OTU в группы на уровне рода и разделили образцы опухолей в зависимости от того, развилось ли у пациентов метастатическое заболевание (рис.2С). На уровне рода (рис. 2E) пропорциональная численность первичной опухоли молочной железы Brevunimonas и Staphylococcus была увеличена у пациентов, у которых развилось метастатическое заболевание. Не наблюдалось изменений в пропорциональной численности таксонов рода Pseudomonas или Prevotella (микробы, регулируемые неоадъювантной химиотерапией) в результате рецидива опухоли.

Рисунок 2.

Первичная микробиота опухоли молочной железы может предсказать рецидив опухоли. Результаты секвенирования опухоли 16S были сгруппированы по тому, развились ли у пациента метастазы в течение 5 лет после операции по резекции первичной опухоли ( n, = 9) или нет ли у пациента метастазов ( n = 24). A, Общая бактериальная нагрузка не различалась между первичными опухолями с рецидивом. B, Рецидив опухоли не повлиял на разнообразие Шеннона в пределах первичной опухоли. C, Относительное количество родов бактерий в различных образцах опухолей визуализируется столбчатыми диаграммами. Каждая полоса представляет собой одну опухоль, а каждая цветная рамка — таксон бактерий. Высота цветного поля показывает относительную численность этого организма в образце. «Другой» представляет таксоны с меньшей численностью. D, Первичные опухоли молочной железы от пациентов, у которых позже развились метастазы, не демонстрировали различий в пропорциональной численности на уровне бактериального типа. E, На уровне рода первичные опухоли молочной железы от пациентов, у которых позже развиваются метастазы, имеют повышенную пропорциональную численность таксонов Brevundimonas и Staphylococcus . *, P <0,05, и столбцы ошибок показывают распределение от минимума до максимума.

Ожирение у пациентов изменяет популяции опухолевого микробиома

Мы объединили численность OTU в группы на уровне рода и разделили образцы опухолей на основе ИМТ пациента (дополнительный рис.S1A). Глядя на широкие различия на уровне филумов, ожирение значительно снижает изобилие на уровне филумов бактериодет в ткани опухоли молочной железы (дополнительный рисунок S1B). Также наблюдалась тенденция к увеличению численности опухолевых фирмикутов ( P = 0,1), что частично коррелировало с наблюдаемыми эффектами ожирения в микробиоме кишечника. На семейном уровне ожирение значительно снизило пропорциональную численность опухолей Comamonadaceae (дополнительный рисунок S1C) и Ruminococcacea (дополнительный рисунок S1D).На уровне рода ожирение увеличивало численность опухолей Enterobacteriaceae_unclassified (дополнительный рисунок S1E).

P.

aeruginosa нагруженные эпителиальные клетки опухоли молочной железы наблюдаются в первичных опухолях молочной железы и метастазах в лимфатические узлы

Первичные опухоли молочной железы, залитые парафином, метастазы опухоли молочной железы в лимфатические узлы и прилегающая к опухоли ткань молочной железы окрашивали против P. aeruginosa Специфическое антитело . См. Рис. 3A, где представлены репрезентативные изображения первичных опухолей молочной железы, демонстрирующие градиент P.aeruginosa , связанная с каждой оценкой ИГХ. Типичная первичная опухоль молочной железы, метастазы в лимфатические узлы и нормальная ткань соседней молочной железы, окрашенная на P. aeruginosa , показаны на фиг. 3B. Количественное определение IHC показано на рис. 3C. Приблизительно 56% первичных опухолей имели положительную окраску на P. aeruginosa по сравнению с 20% нормальной окружающей ткани молочной железы. Метастазы в лимфатические узлы также имели более высокие уровни P. aeruginosa с положительным окрашиванием в 48% случаев.Также наблюдалась различная интенсивность окрашивания в положительно окрашенных срезах опухоли. Приблизительно 26% срезов тканей первичных опухолей молочной железы имели показатель IHC 2 или выше, что свидетельствует о градиенте опухолевой бактериальной инфекции, которая может приводить к различным молекулярным сигналам, влияющим на выживаемость раковых клеток или апоптоз.

Рисунок 3.

Повышенная распространенность P. aeruginosa в первичных опухолях молочной железы и метастазах в лимфатические узлы по сравнению с нормальной окружающей тканью молочной железы. A, Репрезентативные изображения первичных опухолей молочной железы с дифференциальной оценкой P. aeruginosa IHC. B, Репрезентативные изображения первичных опухолей молочной железы и метастазов в лимфатические узлы, а также нормальной ткани опухоли, прилегающей к молочной железе, окрашенной антителом против P. aeruginosa . C, Таблица количественного окрашивания тканей P. aeruginosa . Процентное соотношение и общее количество показанных случаев ( n = 10–50).

Биоактивные соединения, продуцируемые бактериями, могут изменять пролиферацию рака молочной железы и чувствительность к химиотерапии

Чтобы определить, является ли P.aeruginosa , секретируемые метаболиты, модулируют передачу сигналов клеток рака молочной железы, мы использовали различные дозы P-CM для лечения клеток MDA-MB-231, 4T1, MCF7, ZR-75-1 и 67NR. Мы продемонстрировали, что низкие дозы P-CM (5–10%) стимулируют рост клеток рака груди в течение 24 часов после введения в клеточных линиях MDA-MB-231, MCF7 и ZR-75-1, тогда как более высокие дозы P-CM (20%) снижают жизнеспособность клеток в клеточных линиях MDA-MB-231, 4T1, MCF7 и 67NR (рис. 4A). Высокие дозы P-CM (20%) стимулировали рост клеток только в клеточной линии ZR-75-1.Мы также объединили химиотерапию с P-CM, чтобы определить, влияют ли бактериальные метаболиты на лекарственную реакцию. P-CM усиливал опосредованную доксорубицином гибель клеток в клеточных линиях MDA-MB-231, 4T1 и MCF7. Комбинация доксорубицина с 10% P-CM не оказала отрицательного эффекта на клеточную линию 67NR. Однако P-CM снижает эффективность уничтожения доксорубицина в клеточной линии ZR-75-1, что, возможно, указывает на специфический для данной клеточной линии фенотип. Однако для большинства протестированных клеточных линий данные показывают, что, хотя низкие дозы P-CM могут стимулировать рост, другие секретируемые факторы усиливают уничтожение раковых клеток при химиотерапии (рис.4Б). Чтобы дополнительно определить, какой из потенциальных метаболитов P. aeruginosa может иметь эти эффекты, мы обработали клетки MDA-MB-231 ЛПС, пиоцианином, лектином, фосфолипазой D и экзотоксином A в присутствии или в отсутствие доксорубицина (рис. 4С). ЛПС стимулировал пролиферацию клеток MDA-MB-231, тогда как пиоцианин (метаболит, производный P. aeruginosa ) усиливал гибель раковых клеток. Лектин, хотя и не оказывал существенного общего эффекта на пролиферацию MDA-MB-231, в сочетании с доксорубицином усиливал опосредованное химиотерапией уничтожение клеток рака молочной железы.

Рисунок 4.

Секретируемые метаболиты P. aeruginosa влияют на выживаемость клеток рака молочной железы и реакцию на доксорубицин (DOX). A, Дифференциальные эффекты кондиционированной среды P. aeruginosa (P-CM) на тройную отрицательную клетку рака груди человека MDA-MB-231, тройную отрицательную клетку рака груди 4T1, клетку рака груди человека ER + MCF7, ZR-75 –1 человеческий ER + клетка рака молочной железы и 67NR мышиный ER + жизнеспособность клеток рака молочной железы ( n = 4–6; *, P <0.05). B, Комбинация P-CM и доксорубицина усиливает противоопухолевые эффекты химиотерапии на MDA-MB-231 клетки тройного отрицательного рака груди человека, клетки тройного отрицательного рака груди 4T1 и клетки рака груди ER + человека MCF7 ( n = 4). C, Введение отдельных P. aeruginosa метаболитов, секретируемых пиоцианином, лектином (PA-I), LPS, экзотоксином A и фосфолипазой D, влияет на жизнеспособность клеток MDA-MB-231 и чувствительность к доксорубицину ( n = 6; * , P <0.05).

Возможные молекулярные механизмы, управляющие дозозависимой двойственностью P-CM

Обработка клеток рака молочной железы MDA-MB-231 и MCF7 P-CM приводила к дозозависимой стимуляции фосфорилированного Akt (Ser473), тогда как все дозы P-CM стимулировал pAkt в клетках рака молочной железы ZR-75-1 (фиг. 5A). Мы не наблюдали активации pAkt в клеточных линиях 4T1 или 67NR, рост обеих из которых не стимулировался низкими дозами P-CM (фиг. 4A). При сочетании P-CM с доксорубицином анализ белка показывает, что P-CM усиливает опосредованное химиотерапией уничтожение путем модуляции апоптоза.Лечение 10% P-CM доксорубицином значительно увеличивало индуцированные доксорубицином уровни расщепленного белка каспазы-7 в линиях клеток рака молочной железы MDA-MB-231 и MCF7 по сравнению с лечением только доксорубицином (фиг. 5B). Обработка P-CM не оказывала отрицательного воздействия на индукцию апоптоза доксорубицином в клеточной линии 4T1. Однако обработка 10% P-CM уменьшала опосредованную доксорубицином расщепленную каспазу-7 в клеточной линии рака молочной железы ZR-75-1.

Рисунок 5.

Апоптотические и пролиферативные молекулярные сигнальные пути, модулируемые секретируемыми P.aeruginosa метаболитов на клетках рака молочной железы. A, Обработка низкими дозами P-CM стимулирует передачу сигналов Akt в процессе выживания в клетках рака молочной железы MDA-MB-231, MCF7 и ZR-75-1 ( n = 3; *, P <0,05). B, Введение P-CM с доксорубицином (DOX) увеличивает экспрессию расщепленного белка каспазы-7 в клетках рака молочной железы MDA-MB-231 и MCF7, что указывает на то, что P-CM усиливает апоптоз в сочетании с химиотерапией в нескольких линиях клеток рака молочной железы ( n = 3; *, P <0.05).

Обсуждение

Человеческое тело содержит немного больше бактериальных клеток, чем человеческие клетки (1,3 бактериальных клетки на каждую человеческую клетку в организме), согласно новым оценкам, опровергающим ранее оцененное соотношение 10: 1, установленное в 1970-х годах (13). Хотя большая часть биомассы бактерий содержится в кишечном тракте, меньшее количество микробов было обнаружено в других органах, расположенных за пределами желудочно-кишечного тракта, включая молочную железу (1). Наша группа недавно определила, что диета может модулировать популяцию микробиоты молочной железы, предполагая пластичность микробиома груди (5).Более того, недавние исследования демонстрируют, что опухоли молочной железы демонстрируют различные бактериальные популяции по сравнению с микробиотой окружающей ткани молочной железы (2–4, 7). Хотя в других отчетах подчеркивалось присутствие бактерий в тканях опухоли груди, эти исследования не показали влияния терапии на микробиом опухоли. Более того, эти первоначальные исследования микробиома опухоли молочной железы по большей части не указывают на возможное функциональное значение этих микробов в микросреде опухоли.В исследовании Урбаниака и его коллег (2) авторы продемонстрировали, что Escherichia coli , обнаруженная в окружающей ткани молочной железы, может стимулировать разрыв ДНК, который может вызвать онкогенез груди, что указывает на возможную роль микробиоты в образовании опухоли груди. Наше исследование было направлено на определение влияния микробиоты опухоли молочной железы на терапевтическую эффективность и исходы рака молочной железы. Наши данные секвенирования 16S опухолей молочной железы у нелеченных или неоадъювантных пациентов, получавших химиотерапию, показывают, что химиотерапия увеличивает пропорциональную распространенность опухоли Pseudomonas .Нормальная ткань молочной железы показывает низкую пропорциональную плотность [приблизительно 5%; для справки см. Urbaniak et al. (1)] из Pseudomonas , тогда как ткань опухоли молочной железы содержит повышенное содержание (приблизительно 20%) Pseudomonas . Неоадъювантная химиотерапия дополнительно увеличивает пропорциональную численность Pseudomonas до 85%, что позволяет предположить, что химиотерапия способствует преимущественному росту или выживанию этих бактерий.

Хотя род Pseudomonas насчитывает более 140 видов, большинство из них встречается в воде или почве (14).Род Pseudomonas содержит лишь несколько патогенных штаммов животных: P. aeruginosa (раневые инфекции, муковисцидоз и госпитальные инфекции у людей), P. oryzihabitans (сепсис у людей) и P. plecoglossicida (геморрагический асцит у рыб). Хотя в настоящее время мы не знаем штамм Pseudomonas , обнаруженный в результатах секвенирования 16S опухолей молочной железы, леченных неоадъювантной химиотерапией, мы предполагаем, что это, скорее всего, P.aeruginosa . Данные окрашивания ТМА с использованием специфического антитела P. aeruginosa показывают, что этот вид обнаружен в образцах опухоли молочной железы. Дальнейшие исследования будут сосредоточены на выделении и характеристике популяций Pseudomonas , специфичных для опухолей молочной железы. P. aeruginosa участвует в госпитальных инфекциях (15). Хотя инфекция, вызванная P. aeruginosa , хорошо изучена при инфекциях, вызванных вентиляторами, хронических ранах и муковисцидозе, ее влияние на онкогенез неизвестно.Молекулярные данные, полученные с помощью области заживления ран P. aeruginosa , предполагают, что биопленка и секретируемые факторы P. aeruginosa могут играть важную роль в различных сигнальных путях, включая гибель клеток, пролиферацию, чувствительность к химиотерапии и / или развитие метастазов. Сигнальный механизм, стимулируемый секретируемым фактором P. aeruginosa , может зависеть от концентрации, обусловленной численностью опухолевых клеток P. aeruginosa . P. aeruginosa секретирует многочисленные протеазы, липазы, липополисахариды, хинолоны, пиоцианин, Cif или корегулируемые гемолизином белки (16–20).Он также образует многоклеточные биопленки, устойчивые к биотическим и абиотическим стрессорам. Литература показала, что P. aeruginosa может расти в присутствии химиотерапии и что доксорубицин стимулировал образование биопленок P. aeruginosa (21). Следовательно, введение химиотерапии может предложить селективное давление, убивающее другие популяции бактерий, одновременно позволяя разрастаться Pseudomonas в микросреде опухоли. Это подтверждается сходным общим количеством бактерий в каждой группе лечения (необработанная химиотерапия по сравнению с неоадъювантной химиотерапией), но более низкими показателями альфа-разнообразия в обработанных химиотерапией опухолях, например, такое же количество бактерий, но меньшее количество экспрессируемых штаммов.

Факторы, секретируемые P. aeruginosa , также могут напрямую влиять на передачу сигналов пролиферации клеток рака молочной железы. P. aeruginosa эффектор секреции фосфолипазы D типа VI (PldA), как было показано, влияет на передачу сигналов эпителиальными клетками легких хозяина посредством активации PI3K / Akt (18). P. aeruginosa также является мощным продуцентом ЛПС (22). Ранее было показано, что LPS-опосредованная стимуляция TLR4 способствует метастазам рака молочной железы через активацию Akt (23). Покажем, что P.aeruginosa кондиционированная среда в низких концентрациях (5-10%) стимулирует рост клеток рака молочной железы MDA-MB-231, ZR-75-1 и MCF7 и активирует протуморигенную передачу сигналов Akt, что позволяет предположить, что пропорциональная численность на среднем уровне (20%) ) из Pseudomonas , обнаруженного в нелеченых опухолях груди, может способствовать выживанию и росту опухоли. Обработка клеток MDA-MB-231 LPS стимулировала пролиферацию, тогда как введение раковых клеток с фосфолипазой D (хотя и происходящей из Streptomyces ) не влияло на жизнеспособность MDA-MB-231, предполагая, что рост, опосредованный P-CM, может быть обусловлен к секреции ЛПС.

Литература указывает на то, что гипоксия (низкая концентрация кислорода, часто обнаруживаемая в солидных опухолях) снижает способность вирулентности P. aeruginosa , на что указывает снижение секреции пиоцианина (24). Пиоцианин является мощным индуктором активных форм кислорода (АФК). В области рака ROS часто считается двухфазным; низкие уровни ROS являются протуморигенными, тогда как более высокие концентрации ROS способствуют гибели клеток. Следовательно, внутриопухолевый P. aeruginosa , подвергнутый гипоксии, будет снижать продукцию пиоцианина, способствуя более низким уровням ROS и передаче сигналов для выживания.Снижение вирулентности, наблюдаемое у P. aeruginosa , подвергшихся гипоксии, также может свидетельствовать о том, почему повышенные уровни бактерий в опухолях не приводят к системной инфекции. Мы продемонстрировали, что введение пиоцианина снижает рост клеток рака молочной железы MDA-MB-231 с наблюдаемой тенденцией к усилению уничтожения доксорубицина, предполагая возможный ROS-зависимый механизм потенцирования P-CM химиотерапии, наблюдаемый в клетках MDA-MB-231.

В микросреде опухоли, P.aeruginosa может оказывать сильное иммуномодулирующее действие. P. aeruginosa секретирует многочисленные продукты, включая металлопротеиназы цинка (AprA и LasB для борьбы с иммунным ответом хозяина; ссылка 16), Cif (ингибирует CFTR и TAP1, предотвращая презентацию антигена; ссылка 20), пиоцианин (ингибирует активность лимфоцитов; ссылка 20). 17), среди прочего, которые могут влиять на набор и функцию иммунных клеток. Это говорит о том, что специфические для опухоли P. aeruginosa продуцируемые биоактивные соединения могут усиливать иммунопротиводействие рака (25).

Используя P-CM, мы показали, что факторов, секретируемых P. aeruginosa , усиливают способность убивать доксорубицин. Транскриптомный анализ эффектов доксорубицина на P. aeruginosa показывает, что доксорубицин увеличивает экспрессию гена pqsH (21). PqsH представляет собой FAD-зависимую монооксигеназу, которая необходима для выработки сигнала хинолона Pseudomonas (PQS; ссылка 26). PQS, хотя и участвует в основном в восприятии кворума, был связан с передачей сигналов p38 MAPK (проапоптотическим) и ингибированием NF-κB (27).Лечение доксорубицином может впоследствии активировать передачу сигналов NF-κB, инициируя собственный путь, способствующий терапевтической резистентности (28). Следовательно, опосредованное PQS ингибирование NF-κB может усиливать опосредованное доксорубицином уничтожение. PQS также служит хелатором трехвалентного железа, где экзогенная обработка PQS приводит к нехватке железа в окружающей среде (29). Раковые клетки проявляют «железную зависимость», и ранее было показано, что методы лечения для снижения уровня железа подавляют рост опухоли груди (30, 31), что указывает на другой возможный молекулярный механизм, с помощью которого секретируемые соединения Pseudomonas могут усиливать чувствительность к химиотерапии.

Благодаря аннотации образцов опухоли молочной железы мы смогли сравнить популяции бактерий первичной опухоли молочной железы между пациентами, у которых был рецидив опухоли (в течение 5 лет после операции), и теми пациентами, у которых не было рецидива. Мы демонстрируем повышенное содержание Brevundimonas и Staphylococcus в первичных опухолях пациентов с раком груди, у которых позже развилось метастатическое заболевание. Предыдущие исследования микробиома опухоли молочной железы человека выявили повышенную распространенность Brevundimonas во всех подтипах (ER +, HER2 + и TNBC) опухолей молочной железы по сравнению с несоответствующей контрольной тканью молочной железы (8).Однако, насколько нам известно, это первый отчет, предполагающий, что повышение уровня Brevundimonas коррелирует с развитием метастазов. Необходимы дальнейшие исследования для изучения потенциального воздействия опухоли груди Brevundimonas на миграцию раковых клеток и метастатические сигнальные каскады.

Многие критические замечания в адрес исследований микробиома опухолей включают возможность искажения результатов контаминации (32). Низкое содержание микробов в тканях, таких как опухоли молочной железы или груди, будет очень чувствительным к загрязнению образца, которое будет обнаружено как реальное.Эти внешние бактериальные загрязнения могут возникать в хирургическом отделении, у патологоанатома, в хранилище банка опухолей, во время выделения ДНК или во время процесса заделки парафином, и это лишь некоторые из возможных вариантов. Наше исследование учитывает все эти переменные. Во-первых, наш набор образцов опухоли молочной железы был собран за 9-летний период (2004–2013 гг.), Что ограничило любые возможные контаминации, которые могли произойти либо в хирургическом отделении, либо у патологоанатома. Наличие одинаковых популяций бактерий во всех этих местах в течение 9-летнего периода было бы редкостью.Во-вторых, для контроля любого возможного хранения банка опухолей или загрязнения изоляции ДНК мы использовали микроматрицу опухоли, купленную у сторонней компании, чтобы служить в качестве валидационной когорты для наших значительно регулируемых микробов, которые были обнаружены с помощью секвенирования 16S. Кроме того, любое загрязнение окружающей среды, которое могло произойти во время выделения образцов ДНК, будет происходить во всех группах, потому что эти анализы выполнялись как групповые образцы и, следовательно, не могли быть выражены по-разному в зависимости от группы лечения.Образцы из нашего банка опухолей также служат в качестве контроля для любого возможного загрязнения в процессе заливки парафином в когорте опухолевых микрочипов. Эти непредвиденные обстоятельства для внешнего заражения в целом усиливают наше исследование, тем самым демонстрируя, что опухоли груди имеют свою собственную популяцию микробиоты и что эти популяции бактерий модифицируются неоадъювантной химиотерапией, которая модулирует передачу сигналов клеток рака груди, чтобы повлиять на результат. Кроме того, мы также показываем функциональную значимость опухоли груди P.aeruginosa, , модулирующий пролиферацию клеток рака молочной железы и чувствительность к доксорубицину.

Мы демонстрируем, что терапевтические методы изменяют микробиоту опухоли, предполагая роль определенных бактерий в потенциальном увеличении скорости ответа на неоадъювантную химиотерапию и улучшении исходов рака. Эти данные также могут быть экстраполированы, чтобы предположить, что микробиота опухоли может повлиять на такие результаты, как улучшение безрецидивной выживаемости и / или общей выживаемости. Наше наблюдение, что определенные популяции микробиоты первичной опухоли груди имеют повышенную вероятность рецидива рака груди, предполагает, что изменение микробиома опухоли потенциально может снизить частоту рецидива опухоли.Однако необходимы дальнейшие исследования с увеличенным количеством образцов, чтобы более четко определить роль микробиоты опухоли в метастазах. В этом ретроспективном анализе операбельного рака молочной железы микробиота опухоли молочной железы может улучшить реакцию на неоадъювантную химиотерапию за счет повышения терапевтической эффективности. Необходимы дальнейшие исследования для оценки возможной роли микробиома в улучшении исходов рака груди.

Раскрытие информации о потенциальных конфликтах интересов

О потенциальных конфликтах интересов не сообщалось.

Вклад авторов

Концепция и дизайн: A. Chiba, M. Howard-McNatt, K.L. Повар

Разработка методики: А. Чиба, К.Л. Повар

Сбор данных (предоставленные животные, приобретенные и обслуживаемые пациенты, предоставленные помещения и т. Д.): A. Chiba, A. Bawaneh, C. Velazquez, E.A. Левин, Н. Леви-Поляченко, С.А.Йейтс-Алстон, Д. Сото-Пантоя, К. Повар

Анализ и интерпретация данных (e.g., статистический анализ, биостатистика, вычислительный анализ): D.R. Сото-Пантоя, К. Повар

Написание, рецензирование и / или исправление рукописи: A. Chiba, M. Howard-McNatt, E.A. Левин, Н. Леви-Поляченко, С.А.Йейтс-Алстон, С.П. Диггл, Д. Сото-Пантоя, К. Cook

Административная, техническая или материальная поддержка (например, отчетность или систематизация данных, построение баз данных): K.Y.J. Ясно, А. Wilson

Научный руководитель: K.Y.J. Clear, K.L. Повар

Благодарности

D.R. Сото-Пантоя поддерживался K22CA181274. К.Л. Кук был поддержан Фондом исследований хронических заболеваний, грантом для ученых Американского онкологического общества (RSG-16-204-01-NEC) и грантом Career Catalyst от Фонда Сьюзан Г. Комен (CCR18547795). Услуги общих ресурсов были предоставлены грантом P30CA012197 онкологического центра NCI Баптистского комплексного онкологического центра Уэйк Форест.

Расходы на публикацию этой статьи были частично покрыты за счет оплаты страницы.Таким образом, данная статья должна быть помечена как реклама в соответствии с 18 U.S.C. Раздел 1734 исключительно для указания этого факта.

Сноски

• Примечание: Дополнительные данные для этой статьи доступны на сайте Molecular Cancer Research Online (http://mcr.aacrjournals.org/).

• Mol Cancer Res 2020; 18: 130–9

• Получено 28 апреля 2019 г.
• Исправление получено 26 августа 2019 г.
• Принято 15 октября 2019 г.
• Опубликовано 18 октября 2019 г.

• © Американская ассоциация исследований рака, 2019 г.

Произошла ошибка при настройке пользовательского файла cookie

Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности. Если ваш браузер не принимает файлы cookie, вы не можете просматривать этот сайт.

---

Настройка вашего браузера для приема файлов cookie

Существует множество причин, по которым cookie не может быть установлен правильно. Ниже приведены наиболее частые причины:

• В вашем браузере отключены файлы cookie.Вам необходимо сбросить настройки своего браузера, чтобы он принимал файлы cookie, или чтобы спросить вас, хотите ли вы принимать файлы cookie.
• Ваш браузер спрашивает вас, хотите ли вы принимать файлы cookie, и вы отказались.
  Чтобы принять файлы cookie с этого сайта, нажмите кнопку «Назад» и примите файлы cookie.
• Ваш браузер не поддерживает файлы cookie. Если вы подозреваете это, попробуйте другой браузер.
• Дата на вашем компьютере в прошлом. Если часы вашего компьютера показывают дату до 1 января 1970 г.,
  браузер автоматически забудет файл cookie.Чтобы исправить это, установите правильное время и дату на своем компьютере.
• Вы ​​установили приложение, которое отслеживает или блокирует установку файлов cookie.
  Вы должны отключить приложение при входе в систему или проконсультироваться с системным администратором.

---

Почему этому сайту требуются файлы cookie?

Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности, запоминая, что вы вошли в систему, когда переходите со страницы на страницу. Чтобы предоставить доступ без файлов cookie
потребует, чтобы сайт создавал новый сеанс для каждой посещаемой страницы, что замедляет работу системы до неприемлемого уровня.

---

Что сохраняется в файле cookie?

Этот сайт не хранит ничего, кроме автоматически сгенерированного идентификатора сеанса в cookie; никакая другая информация не фиксируется.